Cтраница 4
Для идентификации отдельных каротиноидов, выделяемых хроматографическим путем, применяют спектральный анализ. При этом следует учитывать, что спектры поглощения каротиноидов в их видимой области зависят главным образом от так называемых хромофорных групп. Полиены с одинаковыми хромофорами имеют те же самые спектральные характеристики; так, например, ( 3-каротин, криптоксантин и зеаксантин оптически неразличимы, в то же время они имеют различные коэффициенты распределения в несмешивающихся растворителях. Иногда хроматографически однородные продукты имеют различные спектры, что служит указанием на присутствие смеси веществ. Таким образом, хроматографический анализ и спектроскопия являются примером двух взаимно дополняющих методов анализа каротиноидов. [46]
Затем был проведен решающий опыт. С ( 1 100, СНС13) адсорбировались на колонке диаметром 7 см. После проявления верхняя и нижняя зоны были выделены, а промежуточная зонасновахроматографи-ровалась и снова отделялись верхняя и нижняя зоны. После третьего хроматографирования элюаты верхней зоны дали кристаллы с [ alca 145, соответствующие вращению ксантофиллов листьев; элюат нижних зон, который характеризовался спектром зеаксантина, был оптически неактивен. [47]
Затем был проведен решающий опыт. После проявления верхняя и нижняя зоны были выделены, а промежуточная зона снова хроматографц-ровалась и снова отделялись верхняя и нижняя зоны. После третьего хроматографирования элюаты верхней зоны дали кристаллы с [ a ] Ccl - J-1450, соответствующие вращению ксантофиллов листьев; элюат нижних зон, который характеризовался спектром зеаксантина, был оптически неактивен. [48]
Действием ультразвука, механическим разрушением, обработкой детергентами из хлоропластов удается выделить фракции частиц, отличающиеся по размерам, а главное, по содержанию пигментов, марганца, меди, цитохрома, дополнительных пигментов, по спектроскопическим характеристикам агрегатов хлорофилла и их фотохимической активности, по другим параметрам. Например, в более крупных частицах, сепарированных центрифугированием хлоропластов после обработки поверхностно-активными веществами, оказалось больше марганца, хлорофилла Ь, ксантофиллов, их модельные реакции отвечали фотосистеме II. Только в них присутствовали ксанто-филы, виолаксантин и зеаксантин, обратимые реакции эпоксиди-рования-дезэпоксидирования которых ранее связывали с выделением кислорода. [49]
Каротиноиды зеленых растений находятся вместе с хлоро-филлами в пластидах - хлоропластах. Самым распространенным представителем каротинов является р-каротин; а-каротин сопровождает его в небольших количествах, но не всегда. В хлоропластах листьев в значительных количествах находятся ксантофиллы: лутеин, виолаксантин, неоксантин и зеаксантин. Лутеин по своей структуре является 3 3 -дигидрокси-а - каро-тином, зеаксантин - 3 3 -дигидрокси-р - каротином, неоксантин - тригидрокси-5: 6-моноэпокси-р - каротином, виолаксантин - 3 3 -дигидрокси - 5: 6 - 5: б - диэпокси-р-каротином. [50]