Связывание - фермент
Cтраница 2
Из последнего соотношения видно влияние изменений Ль и L0 ня эффективность связывания фермента: их взаимная зависимость иллюстрируется рис. 3.3. Полученные кривые представляют собой прямоугольные гиперболы, подобные изотермам насыщения Ленг-мюра или уравнению Михаэлиса - Ментен. Из рис. 3.3, например, следует, что при обычной концентрации лиганда ( 10 ммоль / л) достаточно эффективное связывание фермента происходит при / Сь 10 - 3 моль / л, в то время как при более высоких значениях / ( L фермент удерживается плохо. [16]
Превращение основного состояния фермент-субстратного комплекса в переходное ведет к увеличению прочности связывания фермента с субстратом ( точнее, измененных или активированных фермента и субстрата) и к уменьшению активационного барьера реакции. При этом в согласии с основными положениями теории переходного состояния уменьшение свободной энергии активации соответствующей стадии ферментативной реакции определяется разницей свободных энергий реального и гипотетического фермент-субстратного комплекса. Следовательно, если напряжения или деформации, существующие в фермент-субстратном комплексе, снимаются в переходном состоянии реакции, то они выгодны для фермента на стадии каталитического превращения комплекса. Чем более выражены такие напряжения в фермент-субстратном комплексе, тем выше каталитическая константа ферментативной реакции. [17]
Укажите возможные функции металлов в ферментативном катализе: а) участвуют в связывании фермента с субстратом; б) способствуют связыванию эффектора с аллостери-ческим центром; в) участвуют в связывании фермента с коферментом; г) стабилизируют четвертичную структуру фермента. [18]
Связывание фермента, меченного флуоресцеином, на активированных бром-цианом сефарозе или сефадексе осуществляют аналогично связыванию немеченного фермента. Меченные флуоресцеином антитела связывают на ферменте, иммобилизованном на матрице, из 0 1 М раствора бикарбоната атрия. Неразбавленную меченую антисыворотку смешивают с равным объемом суспензии фермента, связанного с нерастворимым носителем, и термостатируют 1 ч при 37 С и еще 12 ч при 4 С. После перенесения материала на стеклянный фильтр неспецифически сорбированные компоненты удаляют интенсивным промыванием 0 1 М бикарбонатом натрия. [19]
Так как препараты фосфоцеллюлозы отличаются между собой, целесообразно предварительно установить количество ионообменника, необходимое для связывания фермента. Берут ( в расчете на сухой вес) 5 г фосфоцеллюлозы, уравновешенной буфером А, и добавляют определенную порцию раствора белка. В элюате определяют активность глюкозофосфатизомеразы. Последующие порции белка добавляют до полного насыщения ионообменника ферментом. На основе этих данных рассчитывают количество фосфоцеллюлозы, требующееся для связывания всего фермента. Суспензию перемешивают 30 - 40 мин, после чего в элюате определяют ферментативную активность, чтобы убедиться в полноте адсорбции фермента. [20]
Молекула апофермента выполняет, невидимому, две главные функции: 1) активирование простетической группы и 2) связывание фермента с субстратом. Для объяснения механизма активации простетической группы ( кофермента) было выдвинуто представление, согласно которому апофермент фиксирует на своей поверхности простетическую группу в таком положении, которое наиболее благоприятно для взаимодействия с субстратом. Можно легко себе представить, что этим путем облегчается возможность столкновений молекул субстрата с активной группой фермента. [21]
Токсическое действие мышьяка на живые организмы обусловлен тремя процессами: 1) разобщение процессов окислительного фосфс рилирования путем арсенолиза; 2) связывание ферментов, содержащи группу - SH; 3) осаждение белков протоплазмы клеток. Ввиду тог что подобные процессы могут проходить во всех живых организма; избирательность действия соединений мышьяка невелика. [22]
Можно полагать, что сохранение этой структуры необходимо для действия механизма обратной связи и что трехмерная или даже четырехмерная весьма лабильная конфигурация фермента приобретает большую устойчивость при связывании фермента с молекулой ретроингибитора. [23]
Укажите возможные функции металлов в ферментативном катализе: а) участвуют в связывании фермента с субстратом; б) способствуют связыванию эффектора с аллостери-ческим центром; в) участвуют в связывании фермента с коферментом; г) стабилизируют четвертичную структуру фермента. [24]
Реже предполагается, что такие изменения обусловлены конформационными факторами, несмотря на то что по сравнению с нативными ферментами устойчивость аффинных лиганов к тепловой инактивации или денатурирующим агентам явно указывает на конформационные изменения или предрасположенность к таковым в результате связывания фермента с носителем. Среди различных физико-химических методов, разработанных для исследования конформации белков в растворе, наиболее легко приложимым для конформационных исследований иммобилизованных белков является, по-видимому, флуоресцентный метод, для которого и интенсивность, и характер спектра зависят от окружения флуоресцирующих групп и реагируют на изменения этого окружения. [25]
Если по гипотезе Хироми каталитическая константа пропорциональна гидролитическому коэффициенту k0, который является строго характеристическим для данного фермента, и определяется исключительно соотношением констант ассоциации субстрата в продуктивном и непродуктивном фермент-субстратном комплексах ( 17), то по гипотезе Тома величина гидролитического коэффициента зависит от способа связывания фермента с субстратом и от степени полимеризации последнего. На наш взгляд, это придает настолько большую гибкость расчетам па основании концепции Тома, в особенности с помощью машинного анализа, что может в отдельных случаях делать бессмысленными определения показателей сродства индивидуальных сайтов активного центра - фермента, поскольку все наблюдаемые кинетические эффекты могут быть объяснены в рамках вариации гидролитического коэффициента при изменении структуры олигомерного субстрата и способов его связывания с ферментом. [26]
Для связывания белка не требуется предварительно активировать носитель. Связывание фермента ( через аминогруппы лизина или гидроксильные группы серина и тирозина) происходит при определенных значениях рН, различных для разных ферментов. [27]
 |
Биосинтез пиримидиновых нуклеотидов. [28] |
Два фермента, катализирующие последние две реакции, образуют другой комплекс и связаны также ковалентно. Вероятно, ко-валентное связывание функционально родственных ферментов и синтезирование в эквимолярных количествах является общим явлением у эукариот, что дает возможность создавать мультифер-ментные комплексы. [29]
Итак, для действия эндоферментов по механизму неупорядоченной атаки характерной является 5-образная форма кинетической кривой накопления мономера. Такая форма обусловлена постепенным ухудшением связывания фермента с полимерными цепями субстратов по мере уменьшения их степени полимеризации, и поэтому положение точки перегиба на кинетической кривой определяется структурой ( картой) активного центра фермента. [30]
Страницы: 1 2 3 4