Cтраница 4
Другие авторы, особенно Блэкберн, Миддлбрук и Филлипс [251], а также Деснуэлли и Казал [252], предполагали наличие оксазолиновых колец в белках и отмечали необычную лабильность пептидов серина и треонина к кислотному гидролизу. Позднее Эллиот [253, 254], используя динитрофторбензол в качестве реактива для обнаружения свободных аминогрупп, наглядно показал, что под действием концентрированной серной кислоты пептидные связи, образованные аминогруппами серина и треонина в фиброине шелка и лизоциме, превращаются в О-эфирные связи. [46]
Для всех соединений аминокислот с динитрофторбензолом величины RJ хорошо известны, и ими можно воспользоваться для опознания аминокислоты. [47]
Концевой лизин дает а е-бис-динитрофенилыюе производное; лизин, расположенный в середине цепи или на С-конце, дает е-моноди-нитрофенильное производное. Фенольная группа тирозина и имино-группа гистидина также реагируют с динитрофторбензолом, но образующиеся производные расщепляются в условиях кислотного гидролиза пептидной связи. Для определения последовательности аминокислот белок подвергают частичному гидролизу и определяют строение образовавшихся ди - и трипептидов анализом концевых групп. Если в гид-ролизате охарактеризованы все возможные дипептиды, то последовательность аминокислот в белке может быть однозначно определена без дальнейшего анализа концевых групп. [48]
Метод динитрофениляции впервые был предложен Сэнджером в 1945 г. и состоит в том, что в слабощелочной среде динитрофторбензол реагирует с N-кон-цевыми группами белка или пептида и образует соответствующие динитрофенилпроизводные. Связь между динитробензолом и аминогруппой устойчива к действию крепких кислот, благодаря чему динитрофенилпроизводные белка можно подвергать кислотному гидролизу. [49]
Наряду с сульфгидрильными и дисульфидными группами при денатурации белков наблюдается увеличение реактивности и других химически активных групп. В случае р-лактоглобулина было найдено, что все 31 е-аминогруппы лизина ацетилируются кетеном, но лишь 19 реагируют с динитрофторбензолом. При денатурации нагреванием, спиртом и солянокислым гуанидином в се е-аминогруппы становятся реактивными. Тот факт, что все е-аминогруппы могут ацетилироваться и что только некоторые из них реагируют с динитрофторбензолом, указывает на экранирование части этих групп складками полипептидных цепей. [50]