Смесь - белок
Cтраница 4
 |
Фронтальный анализ глюкози-даз на ТЭАЭ-целлюлозе в 0 07 М фосфатном буфере с рН 6 0. [46] |
Чисто элютивная техника, состоящая в том, что в верхней части колонки сорбируют смесь белков, которые проявляют буферным раствором того же состава и рН, из которого сорбирована смесь, редко применяется для разделения белков. При проявлении 0 05 Мтрис-буфером с рН 8 6 они выходят из колонки в виде двух отдельных пиков. [47]
В действительности их имеется намного больше, чем шесть, так как некоторые из пиков представляют смеси белков с одинаковыми подвижностями. Когда эта диаграмма была получена впервые144, были известны только три компонента плазмы крови ( альбумин, глобулин и фибриноген), и открытие, что глобулин может быть разделен на три фракции ( а, Р и у; пик для ах не был обнаружен в этой первой работе), вызвало плодотворное развитие работ по выделению и очистке индивидуальных белков не только из крови, но также из других жидкостей и тканей живых систем. [48]
При ионообменной хроматографии ионообменная смола представляет собой неподвижный слой, тогда как, например, раствор смеси белков является подвижным слоем. Так, белки в катионной форме связываются с катионобменной карбоксиметилцеллюлозой ( КМЦ), несущей отрицательные заряды на целлюлозной матрице. Последующую элюцию белков проводят с помощью буферных растворов возрастающей ионной силы. Первыми элюируют белки, более слабо связанные с КМЦ. [49]
 |
Фракционирование яичных белков на КМ-целлюлозе. [50] |
Следует учитывать также, что условия рехроматографии никогда не бывают вполне идентичными таковым при первичной хроматографии смеси белков: при рехроматографии отсутствуют белковые компоненты, которые могут играть роль компонентов-вытеснителей при первичной хроматографии; кроме того, при повторном диализе перед рехроматографией могут быть устранены и некоторые низкомолекулярные примеси. В ряде случаев применение градиентной элюции может дать лучшее разделение компонентов смеси, чем ступенчатое. [51]
Получение нетрадиционных пищевых продуктов связано с решением ряда научно-технических проблем: поиск методов формования и структурирования смесей белков при переработке в продукты с необходимыми физико-химическими свойствами, придание продуктам необходимых цвета, вкуса и запаха с помощью пищевых красителей, вкусовых и ароматических добавок, регулирование состава и биологической ценности продуктов обогащением их аминокислотами, витаминами, микроэлементами и другими незаменимыми пищевыми добавками. Решение этих проблем невозможно без использования разнообразных продуктов малой химии специального качества, производство многих из них потребуется организовать заново. [52]
После достижения полной экстракции белков, т.е. перевода белков в растворенное состояние, приступают к разделению - фракционированию смеси белков на индивидуальные белки. [53]
Хроматографнческие методы, в которых разделение компонентов смеси основано на различии в размерах, форме или суммарном заряде молекул, часто недостаточно эффективны для разделения смесей белков. Успех метода зависит от того, удастся ли найти вещество, которое будет специфически взаимодействовать с подлежащим очистке белком. Для фермента таким веществом может быть конкурентный ингибитор катализируемой этим ферментом реакции, а для участвующего в гормональной регуляции белка-рецептора - соответствующий гормон. Это вещество связывают с подходящим нерастворимым гидрофильным носителем, и полученный материал используют при хроматографии как стационарную фазу. Вещества такого типа часто сами оказываются большими природными макромолекулами, и приемы, используемые для соединения их с носителями, сходны с методами приготовления иммобилизованных ферментов [ см. разд. [54]
В составе сывороточных альбуминов быка и человека наблюдаются заметные различия, но значение этого факта оценить трудно, потому что каждый из альбуминов может представлять собой смесь весьма сходных белков. [55]
Страницы: 1 2 3 4