Белковая смесь
Cтраница 1
 |
Прибор Тизелиуса для электрофореза. [1] |
Белковые смеси анализируют электрофорезом на бумаге. Наносят анализируемую смесь и создают электрическое напряжение. По истечении определенного времени ( оно зависит от свойств разделяемых белков, носителя и приложенной разности потенциалов) проявляют электро-фореграммы химическими или биохимическими методами. [2]
Белковые смеси анализируют электрофорезом на бумаге. Наносят анализируемую смесь и создают электрическое напряжение. По истечении определенного времени ( оно зависит от свойств разделяемых белков, носителя и приложенной разности потенциалов) проявляют электрофореграммы химическими и биохимическими методами. [3]
Исследуемую белковую смесь растворяют в буферном растворе в объеме 1 мл 4 ( по 2 - 4 мг каждого белка) и вносят в колонку. Нанесение пробы на колонку проводят, как описано на с. [4]
Компоненты белковой смеси, нанесенные на специальную фильтровальную бумагу, смоченную буферным раствором, мигрируют в электрическом поле в направлении и со скоростью, зависящими от заряда их молекул. В результате смесь делится - на фракции, которые можно выявить специальными методами окрашивания и измерить количественно. [5]
Если исследуемая белковая смесь имеет общие с раствором ре-ференс-белка антигены, то продольная полоса преципитации, сливаясь с теми полосами, которые появились ранее при иммуноэлек-трофорезе, образует как бы продолжение последних ( фиг. [6]
Степень чистоты белковой смеси во время тепловой обработки часто также имеет решающее значение. Обычно менее чистые вытяжки или смеси являются более стойкими по отношению к термической денатурации. [7]
 |
Схематическое изображение иммуноаффинной хроматографии. [8] |
А или белковой смеси ( в случае б) пропускают через колонки. [9]
 |
Электрофоретическая диаграмма белков сыворотки крови ( из Гауровица, 1965. [10] |
Поскольку перед разделением белковая смесь находится только в нижней и средней секциях одного отделения кюветы, то при электрофорезе происходит нисходящее перемещение границы раздела белок-растворитель в одном и восходящее перемещение в другом колене кюветы. В результате получают две диаграммы, которые вертикаль - - но симметричны и соответствуют нисходящей и восходящей границам. Обычно производят снимки только нисходящей границы. [11]
Очень тонкую дифференцировку сложных белковых смесей позволяет осуществить качественный иммуно - химич. I Еще большие возможности дает сочетание этого метода с электрофорезом в агаровом геле ( иммуноэлектро-форетич. Последний метод позволяет выявить в сыворотке человека более 25 белковых фракций, различающихся по антигенным свойствам. [12]
Очень тонкую дифференцировку сложных белковых смесей позволяет овеществить качественный иммунохимич. Еще большие возможности дает сочетание этого метода с электрофорезом в агаровом геле ( иммуноэлектро-форетич. Последний метод позволяет выявить в сыворотке человека более 25 белковых фракций, различающихся по антигенным свойствам. [13]
Если в ходе фракционирования белковых смесей применяются большие концентрации органических растворителей без точного регулирования величины ионной силы раствора, то можно предполагать, что органический растворитель в данном случае скорее действует как неспецифический осаждающий агент, чем создает соответствующую диэлектрическую постоянную среды, необходимую для контролируемого разделения. [14]
Этим методом были изучены многие белковые смеси, прежде всего сыворотка крови и гемоглобины. Как уже говорилось, в сыворотке крови крахмальный гель позволяет обнаружить до 30 компонентов; это количество столь велико, что до сих пор не установлено, какую сыворотку считать нормальной, так как у каждого животного и человека имеются индивидуальные, генетически детерминированные отличия. При сравнении с данными электрофореза на бумаге следует помнить, что порядок расположения компонентов в геле может быть совершенно иным. Кроме того, электрофоре-грамма в геле, вообще говоря, неаддитивна благодаря влиянию одних компонентов на подвижность других, так как присутствие белков в высокой концентрации в узких зонах приводит к локальным изменениям проводимости, рН и вязкости среды; иногда наблюдается и прямое взаимодействие белков. Для сопоставления с результатами электрофореза сыворотки крови на бумаге применяют так называемый двухмерный электрофорез. В этом случае сыворотку сначала разделяют на бумаге. После этого зоны не фиксируют, а влажную бумагу прижимают к поверхности крахмального геля и проводят дополнительный электрофорез в геле в перпендикулярном направлении. Лишь после этого зоны проявляют. Этот метод позволяет еще более улучшить разделение. [15]
Страницы: 1 2 3 4