Cтраница 4
![]() |
Схема аппарата для электрофореза.| Зависимость вязкости от концентрации коллоида. [46] |
Установка для свободного электрофореза сложна; она имеет фотооптическую систему для регистрации результатов разделения белковой смеси. При этом значении рН белки заряжаются отрицательно и движутся к аноду. Концентрация электролита невысока и не оказывает коагулирующего воздействия на белок и не образует слишком плотной ионной атмосферы, замедляющей его движение. В то же время она достаточно велика, чтобы создать необходимую буферную емкость. В связи с различием в размерах глобул и в величине заряда скорость движения белков крови оказывается неодинаковой. При соблюдении определенных условий удается получить и большее число фракций. [47]
Здесь будут рассмотрены только те варианты электрофореза, которые пригодны для разделения существенных количеств белковых смесей с выделением отдельных фракций. Применение для этой цели свободного электрофореза в растворе без каких-либо опорных сред затруднено теми же обстоятельствами, что и препаративное ультрацентрифугирование. При попытке выделить ту зону раствора, где расположена та или иная фракция, легко возникают токи жидкости, размывающие границы и перемешивающие содержимое различных зон. [48]
Из белковых препаратов следует удалять небелковые соединения, если твердо установлено, что последние содержатся в белковой смеси в качестве случайных компонентов. При точных анализах принято возможно полнее удалять небелковые вещества до проведения анализа или прибегать к соответствующим аналитическим способам их определения. [49]
В поисках подходящих условий для четкого разделения некоторых компонентов 255 - 260 ] были получены полные кривые высаливания белковых смесей различными солями. Однако взаимное перекрывание нескольких ветвей результирующих кривых достаточно велико, и можно предположить, что лишь немногие фракции, полученные из таких смесей в результате однократного высаливания, являются гомогенными. [50]
При различных патологических изменениях в организмах часто наблюдаются определенные изменения в составе и электро-форетическом поведении извлеченных из организма белковых смесей. Данные электрофореза, таким образом, существенны при физиологических и клинических исследованиях. [51]
Так, на тонком сочетании действия спирта, солей и охлаждения до 268 К основаны способы детального фракционирования белковых смесей по Кону. [52]
Ферменты, гидролизующие белки или действующие на небелковые компоненты сложных белков, могут выделяться или активироваться во время подготовки белковой смеси к фракционированию. При действии этих ферментов многие из соединений, которые должны быть получены, могут оказаться измененными или разрушенными. Даже если в начале опыта фермент присутствовал в небольших концентрациях, то по мере фракционирования его концентрация может увеличиваться в какой-либо отдельной фракции и нанести большой ущерб. [53]