Инкубационная смесь

Cтраница 4

Митохондрии, выделенные из этиолированных гипокотилей сои, вначале инкубировали 10 мин. При этой инкубации регистрировали поглощение кислорода за 10 мин. После этого в обычной инкубационной смеси изучали окислительное фосфорилированне. [46]

Папаин предварительно активировали, добавляя к пробе 1 мл 0 01 М цианистого калия и 0 25 мл 0 01 М солянокислого цистеина. Концентрация папаина составляла 2 мг / мл инкубационной смеси, трипсина - 3 мг / мл и протеолитина - 10 мг / мл. [47]

Подобрать условия инкубации, при которых обеспечивалось бы постоянство всех параметров кроме того, который исследуется. Это значит, что в ходе эксперимента не должна изменяться температура. Изменение температуры может произойти, например, в тех случаях, когда инкубационная смесь не термостатирована, а эксперимент занимает длительное время либо когда отдельные компоненты реакционной среды, смешиваются в разных соотношениях, имеют неодинаковую температуру. [48]

Соотношение появления тимидилаткиназной активности, синтеза вирусной ДНК и зрелого вируса в клетках почек эмбриона кролика. [49]

Расчет радиоактивности производили на 1 мкг ДНК - Аналогично определяли синтез РНК, только в качестве предшественника использовали уридин-2 - С14, а контакт с изотопом проводили в течение 5 мин. Активность ДНК-синтезирующих ферментов тимидилат - и тимидинкиназы определяли, используя искусственную инкубационную смесь, содержащую эквимолекулярные количества четырех дезоксину-клеозидмонофосфатов ( один из них имел радиоактивную метку ТМФ-С14, а при изучении тимидинкиназной активности в качестве меченого предшественника брали тимидин - С14), энергетическую и фосфолирирующую системы в виде АТФ, фосфоэнолпиру-вата, пируваткиназы, ионы Mg и затравку в виде однонитча-той ДНК - Эту смесь инкубировали 30 мин. [50]

Перед фильтрацией нитроцеллюлозные фильтры раскладывают на кювете с фильтровальной бумагой. Под каждым фильтром подписывают на бумаге его порядковый номер. Колбу Бунзена подключают к водоструйному насосу, укладывают в воронку фильтр матовой стороной вверх. Фильтр сначала промывают 1 мл буфера Д и, не давая ему подсохнуть, наносят в его центр инкубационную смесь. [51]

Из инкубационной смеси сразу же после погружения пробирок в термостат, а также через каждые 30 мин отбирают по 0 1 мл, выливают в мерные пробирки и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Добавляют воду до 1 мл, перемешивают и центрифугируют. Осадок отбрасывают, а центрифугат ( или часть его) переносят в спектрофотометрическую кювету, содержащую все необходимые компоненты для определения транскетолазной активности ( с. Скорость транскетолазной реакции в данном случае должна лимитироваться количеством ксилулозо-5 - фосфата, образовавшимся в инкубационной смеси и добавляемым в спектрофотометрическую кювету в составе центрифугата. [52]

Инкубационную смесь составляют, смешивая компоненты в следующем соотношении: на 1 мл раствора буфера 0 2 мл СаС12, 0 3 мл раствора АТФ, 0 3 мл воды. Только после этого начинают реакцию, добавляя в пробу 0 2 мл раствора миозина, содержащего 2 - 3 мг белка. Смесь хорошо перемешивают и инкубируют при 26 С в течение 3 - 5 мин. Реакцию останавливают добавлением 1 мл 7 5 % - ного раствора ССЦСООН. Раствор тотчас же фильтруют и в фильтрате определяют неорганический фосфат, образовавшийся в процессе ферментативного расщепления АТФ. Для определения предобразованного фосфата параллельно ставят контрольную пробу, в которую СОзСООН приливают к инкубационной смеси перед добавлением миозина. [53]

Страницы: 1 2 3 4