Аффинный сорбент

Cтраница 1

Аффинные сорбенты с ] групповой специфичностью в некоторых случаях не уступают по избирательности сорбентам с индивидуальной специфичностью, а иногда даже имеют свои преимущества. [1]

Аффинный сорбент с групповой специфичностью имеет явное преимущество в том случае, когда ставится задача не только очистки, но и разделения нескольких веществ, наделенных сродством к одному и тому же лиганду. Если степень этого сродства не одинакова для разных веществ группы или если удается подобрать для них различные ( специфические) конкурентные элюенты, то разделение веществ может быть осуществлено хроматографически, в ходе их поочередной элюции с сорбента, что не удалось бы сделать в случае лиганда, обладающего сугубо индивидуальной специфичностью. С позиций очистки одного вещества это же положение дел можно сформулировать следующим образом: снижение избирательности сорбции при использовании сорбентов с групповой специфичностью часто удается компенсировать за счет избирательности аффинной конкурентной элюции. [2]

Аффинные сорбенты на базе полиакриламида и красителей Phenyl Neutral Red и Malachite Green [ Biinemann, Muller, 1978 ] могут быть использованы для фракционирования нуклеиновых кислот и их фрагментов по процентному содержанию в них ГЦ-пар нуклеотидов. В этом случае элюцию ведут линейными градиентами концентрации солей. В частности, таким образом можно отделять ГЦ-богатую сателлитную ДНК или фракционировать рестриктные фрагменты ДНК фага Я, нуклеотидный состав которых значительно изменяется по длине молекулы ДНК. [3]

Аффинный сорбент готовили, как обычно, фиксацией IgG на BrCN-активированной сефарозе. Если на такой сорбент посадить смесь фрагментов нуклеиновых кислот, включающую в себя и ДНК-РНК-гибриды, то ступенчатая элюция 1 М NaCl, 3 М и 5 М NaSCN ( все - в фосфатном буфере) удаляет сначала прочие фрагменты, а затем на последней ступени - истинные ДНК-РНК-гибридные молекулы. [4]

Аффинный сорбент А, приготовленный путем привязки ингибитора - п-аминофенил - р - о - тиогалактопиранозы - непосредственно к сефарозе, не связывает и не задерживает фермент в заметной степени. Прикрепление ингибитора через короткую ножку ( - 10 А) дает сорбент Б, который очень мало задерживает фермент во время его пропускания через колонку. Для освобождения фермента из комплекса нет необходимости в изменении состава буферного раствора, и фермент выходит из колонки сразу же за неактивным белком. Только когда между ингибитором и поверхностью носителя помещена длинная ножка ( - - 21 А), образующийся сорбент В способен сильно связывать р-галак-тозидазу из различных бактериальных источников. Элюи-рование фермента происходит только после замены буферного раствора. [5]

Влияние рН на связывание лактатдегидрогеназы мышцы сердца свиньи е-аминогексаноил - МАВ - сефарозой ( а и № - ( 6-аминогексил - АМР - сефарозой. [6]

Если аффинный сорбент приготовлен из заряженного аффи-нанта, то при увеличении ионной силы раствора аффинность сорбента по комплементарной ему макромолекуле уменьшается. [7]

Такой аффинный сорбент с групповой специфичностью можно использовать, например, для очистки ДНК - и РНК-полиыераз, Т4 - полинук-леотидкиназы и других ферментов метаболизма ДНК. [8]

Хроматография бычьего трипсина на глицилглицил - Ь - аргинин - сефарозе. [9]

На аффинный сорбент, уравновешенный данными концентрациями ингибитора ( бензилоксикарбониларгинина) всегда наносился раствор трипсина, содержащий ингибитор в соответствующей концентрации. График зависимости Vi от ( V - Vt) / [ I0 ] ( рис. 4.4 6) представляет собой прямую, что подтверждает справедливость выведенного уравнения. Из тангенса угла наклона и отрезка, отсекаемого на оси ординат, получены / d0 29 ммоль / л и Уо11 6 мл. [10]

Помимо аффинного сорбента на основе агарозы, несущего краситель Cibacron Blue F3GA ( Affi-Gel Blue), фирма выпускает еще два сорбента, несущие, помимо этого красителя, также анионооб-менные ( диэтиламиноэтил) или катионообменные ( карбоксиметил) группы: DEAE Affi-Gel Blue и CM Affi-Gel Blue. Первый из них предназначен для высокоэффективной очистки IgG, который обычно сорбентом не задерживается, в то время как почти все остальные белки сыворотки ( кроме трансферрина) остаются на колонке. [11]

Разбавление аффинным сорбентом ведет к уменьшению связываемое р, выраженной через концентрации хлорида калия, которые необходимы для элюирования фермента. Емкость сорбента, выраженная в единицах активности фермента, сорбированного на 1 мкмоль нуклео-тида, возрастает при низких концентрациях нуклеотида, хотя абсолютная емкость на 1 г материала колонки с разбавлением уменьшается. [12]

Конечно, аффинный сорбент с высокой концентрацией лиганда является нежелательным во всех случаях. На рис. 5.9 показана аффинная хроматография рецептора ацетилхолина из электрического органа Torpedo californica [30] на сефарозе, содержащей 2 - Ю-3 ( рис. 5.9 а) и 0 4 - 10 - 3 моль / л ( рис. 5.9 6) ЫН ( СН2) 5СО1МН ( СН2) з1 ( СНз) з - Очевидно, что при уменьшении концентрации слабый, неспецифический иопообменник превращается в аффинный сорбент с высокой избирательностью. Последний был с успехом применен для очистки больших количеств основного а-бунгаротоксинсвязывающего компонента мембраны. [13]

Хотя синтез аффинного сорбента с индивидуальной специфичностью при наличии одной из продажных активированных матриц и не представляет особого труда, он все же требует наличия достаточного количества очищенного аффинного лиганда, не инактивирующегося в условиях его посадки на матрицу. Тем не менее прочность аффинного связывания в большинстве случаев оказывается достаточной для удержания нужного вещества на матрице в условиях отмывки с нее всех сопутствующих ему примесей. [14]

В числе аффинных сорбентов, выпускаемых той же фирмой, есть еще один, предназначенный также для ковалентной хроматографии. В отличие от всех предыдущих он па конце довольно длинного спейсера несет атом ртути, охотно связывающий меркаптосоединения. [15]

Страницы: 1 2 3 4