Сорбция - белок
Cтраница 5
Таким образом, можно полагать, что необратимое связывание белков обычными гелевыми сетчатыми карбоксильными полиэлектролитами обусловлено способностью сеток к значительной деформации при повышении значения рН и ионной силы, приводящей к усилению дополни-к тельного взаимодействия с сорбированными молекулами белка. Для сорбции белков перспективны малодеформирующиеся при изменении значения рН и ионной силы сетчатые полиэлектролиты, получаемые преимущественно на основе гидрофильных длинноцепных дивиниль-ных соединений или поливинильных соединений разветвленной структуры. [61]
Ионообменная сорбция белков осуществляется на высокопроницаемых ионитах, структура которых рассмотрена в гл. Высокая избирательность сорбции белков наблюдается на синтетических ионитах, матрицы которых включают различные полярные и гидрофильные радикалы. К ним относятся сополимеры метакри-ловой и в некоторых случаях акриловой кислот с гексагидро-2 3 5-триакрилоилтриазином, полиметилендиметакриламидом, ди-метакрилатом этиленгликоля и другими кроссагентами. [62]
В случае колоночной хроматографии ионообменники работают в условиях, далеких от насыщения. Например, при сорбции белков емкость ионита составляет не более 5 - 10 % от его полной емкости. Образец следует вносить в колонку в небольшом объеме только в том случае, если все операции ( приведение в равновесие колонки и элюента, растворение образца и элюи-рование) проводят в одном, рабочем буферном растворе. [63]
Однако одного этого показателя совершенно недостаточно для характеристики качества сорбента, который предлагается для сорбции каких-то определенных соединений. Если сорбент предлагается для сорбции белков или тяжелых ( радиоактивных) металлов, то именно сорбцию их и нужно контролировать при определении специфической сорбционной активности. С другой стороны, одного контроля специфической сорбционной активности мало, поскольку общая сорбционная активность также характеризует качество сорбента-его способность ( возможно, даже нежелательную) сорбировать другие вещества. [64]
Сорбция пре - Рис 5Л: ИзотеРма адсорбции для аф-кращается, когда все доступные аффинантные центры заняты. Изотерма неспецифической адсорбции характеризует сорбцию белков на неспецифических участках матрицы и на молекулах уже сорбированного белка. [65]
 |
Влияние температуры на элюцию инсулина с колонки ДЭАЭ-целлюлозы 0 005 М трис - HCl буфером ( рН 8 0, содержащим 0 3 М. [66] |
Хроматографию белков обычно проводят при 0 - 4 С, для того чтобы сделать минимальными изменения белков под влиянием ферментативных процессов и бактериальных загрязнений. Исследования влияния температуры на сорбцию белков целлюлозными ионитами немногочисленны. Аналогичные результаты были получены также для альбумина. [67]
Статический или динамический характер носит при этом хроматографический процесс, зависит от прочности исходной сорбции белка и протяженности зоны его связывания по отношению к длине колонки. С этих позиций только что цитированный пример следует отнести к статическому типу хроматографии. [68]
Страницы: 1 2 3 4 5