Неспецифическая сорбция

Cтраница 3

Применение для элюирования специфически сорбированных веществ градиента рН и градиента концентрации соли и влияние ионной силы и неспецифической сорбции рассмотрены далее в гл. [31]

Бантль и соавторы пришли к выводу, что основной причиной задержания рибосомальной РНК на колонке является не ее неспецифическая сорбция, а образование достаточно прочных комплексов между рРНК и фиксированной на колонке 1Юли ( А) - РНК. По-видимому, образование таких комплексов имеет отношение к взаимодействию двух типов РНК в рибосомах. Разумеется, эти комплексы можно разрушить до внесения суммарных препаратов РНК на колонку, но благодаря большому избытку рРНК они будут образовываться на ней снова. [32]

Хроматография 3-галактозидазы из Escherichia coli на сефарозе 4В, модифицированной 3 3 -диаминодипропиламином. [33]

Работы О Карра и др. [26] показали, однако, что наиболее часто причиной мнимой аффинности систем является неспецифическая сорбция на незаряженной пространственной группе или даже не-биоспецифическая сорбция белков, обусловленная гидрофобными взаимодействиями. [34]

При выборе спейсера, помимо длины, следует учесть степень его гидрофобности, поскольку от этого может зависеть неспецифическая сорбция на матрице. Необходимо также выбрать химическую группу, которая окажется на свободном конце спейсера; к этой группе должен присоединяться лиганд. Что касается присоединения спейсера к матрице, то здесь используются те же приемы, какие были описаны для присоединения лигандов к активированным матрицам, поэтому на ближайшем к матрице конце спейсера почти всегда располагается аминогруппа. [35]

Кроме того, для аналитической очистки мРНК авторы предложили предварительно пропускать через колонку раствор тРНК для насыщения центров прочной неспецифической сорбции РНК на целлюлозе. [36]

Довольно высокая концентрация соли, которую рекомендуется вводить в буфер для связывания лиганда ( 0 5 М), нужна для блокирования неспецифической сорбции ионного характера, которая свойственна BrCN-активированной агарозе. [37]

Диаграмма элюирования при разделении различных гемогло-бииов ( F, А, А2, S и С на КМ-сефадексе С-50. [38]

Пористое стекло ( диаметр пор 5 - 250 нм), как и наиболее широко применяемые носители иа основе агарозы, отличается низкой неспецифической сорбцией и высокой емкостью. [39]

Сандберг и Хеглинд [69] использовали насыщенный раствор глицина ( в карбоиатном буфере, рН 9 5) и показали, что он не вносит вклада в неспецифическую сорбцию. Смит [68] также исследовал инактивацию глицином групп активированной бромцианом сефарозы. Действие 10 М глицина при 2 С в трис-буферном солевом растворе ( рН 8 5) фактически предотвращает последующее связывание у - [1311] глобулина. [40]

Для успешного выделения фермента с помощью аффинной хроматографии необходимы очень низкие значения Ki или KL - Обе константы должны быть много меньше, чем любая константа диссоциации для неспецифической сорбции белка на поверхности матрицы. Максимум для KL может быть оценен следующим образом. [41]

Влияние длины пространственной ножки на связываемость некоторых дегидрогеназ на № - ш-аминоалкил - АМР-сефарозе. [42]

Мешающее влияние неспецифической сорбции в биоаффинной хроматографии обсуждается подробно в разд. Неспецифической сорбции можно лучше всего избежать, если использовать гидрофильные пространственные группы, получение которых описано в разд. [43]

Он содержит некоторое количество незамещенных аминогрупп, что обусловливает свойства слабого анионообменника. В ряде случаев это нежелательно ( из-за возможности неспецифической сорбции РНК), и фирма одновременно предлагает сорбент под наименованием Acetylated DBAE-cellulose, у которого свободные аминогруппы аминоэтилцеллюлозы почти полностью алкилированы с помощью уксусного ангидрида. [44]

Существенное усовершенствование в методику хроматографии олигонуклеотидов ввел Тенер, предложивший включить в состав элюента 7 М мочевину. Это позволило подавить агрегацию крупных молекул олигонуклеотидов и их неспецифическую сорбцию ( за счет водородных связей) на полисахаридных матрицах DEAE-целлюлозе и DEAE-сефадексе, которые благодаря этому удалось успешно использовать для фракционирования олигонуклеотидов. При нейтральном рН в присутствии 7 М мочевины элюцией линейным градиентом концентрации NaCl ( 0 - 0 3 М) Тенер успешно разделял олигонуклеотиды по длине, а в кислой области рН, используя вклад положительного заряда оснований, олигонуклеотиды одинаковой длины - по составу. При рН 4 - 4 4 разделение шло главным образом по содержанию остатков цитозина и аденина ( они приобретают заметный заряд), а при рН 2 7 - по содержанию урацила, который остается при этом незаряженным. [45]

Страницы: 1 2 3 4