Cтраница 3
Из приведенных выше опытов вытекает, что причиной специфичности тирозиназы не является способность расщеплять тирозин перед окислением. [31]
Медь была найдена также в ферментах лакказе, тирозиназе, оксидазе аскорбиновой кислоты [98] и в двух белках, выделенных из плазмы крови и из печени быка, - гемокуперине и гепа-токуперине. Биологическая функция этих белков пока неизвестна. [32]
В первую очередь была исследована зависимость образования меланина от концентрации тирозиназы. [33]
Очищенная, вполне нейтральная пероксидаза всегда задерживает окисление тирозина очищенной тирозиназой как в присутствии, так и в отсутствии перекиси водорода. [34]
Помимо этих методов, позволяющих более или менее полно разделить составные части тирозиназы, следует упомянуть здесь еще о наступающем самопроизвольно при некоторых обстоятельствах, по еще не исследованием ближе разложении оксигеназы, содержащейся в тирозиназе. [35]
Антитирозиназа, образующаяся под действием животной тирозиназы, оказывается недействительной против растительной тирозиназы, и наоборот. Принимая по внимание, что действие тирозиназы задерживается редуцирующими и другими подробно не исследованными веществами ( Бах33) и что опыты Ж ессара были произведены только качественно, существование специфических аытитирозиназ нельзя еще считать доказанным. Фюрт и Иерузалом, выработавшие количественный ( спектрофотометрический) метод исследования действия тирозиназы ( см. ниже), не подтвердили образования антитирозиназы в животном организме. Они указали на то, что некоторые химические соединения задерживают ферментативную реакцию и это может быть принято за действие настоящих антиферментов. [36]
Дубильная и галловая кислоты окислялись как лакказой, так и тирозиназой и поэтому не могут быть использованы для дифференцирования двух энзимов. По этой причине для лакказы был предложен ] - нафтол, а для пробы на тирозиназу - п-кре-зол. [37]
При подходящем разбавлении перекись водорода не оказывает никакого влияния на действие свежей нормальной тирозиназы. При определенных изменениях тирозиназы, которые могут быть вызваны искусственно или происходят самопроизвольно, ее действие на окисление тирозина чрезвычайно ускоряется прибавлением разбавленной перекиси водорода. В нормальной тирозиназе образующиеся из оксигеназы перекиси имеются, повидимому, в достаточном количестве для полного использования соответственной пероксидазы. При изменениях тирозиназы оксигеназа, которую a priori можно рассматривать как очень неустойчивое вещество, разрушается в первую очередь и может быть заменена соответствующим количеством перекиси водорода для окисления тирозина. Это объяснение находится в полном соответствии со всеми полученными за последнее время данными, относящимися к области окислительных ферментов. [38]
На основании этих данных можно считать довольно вероятным существование пероксидазы в тирозиназе. [39]
Шода и Швейцер14 сделали недавно существенное наблюдение, что гликокол окисляется тирозиназой из кожуры картофеля с образованием формальдегида, углекислоты и аммиака. [40]
В связи с этим он предположил, что, подобно фенолазе, тирозиназа состоит из оксигеназы, образующей перекись, и пероксидазы, причем специфичность тирозиназы должна обусловливаться особенностью ее пероксидазы. Но при дальнейшем исследовании этого вопроса Бах38 на основании точных количественных опытов пришел к заключению, что ускоряющее действие перекиси водорода не связано с непосредственным участием последней в окислении тирозина, а обусловливается разрушением редуцирующих примесей, задерживающих действие тирозиназы. На нормальную, в достаточной степени очищенную тирозиназу перекись водорода никакого ускоряющего действия не оказывает. [41]
Все авторы, занимавшиеся вопросом о тирозиназе, приходят к выводу, что тирозиназа не оказывает заметного действия на тирозин в отсутствии кислорода. Но что при действии тирозиназы наряду с окислительным процессом происходит вполне определенный восстановительный процесс, насколько мне известно, до сих пор еще никем не высказывалось. [42]
Дифенолоксидаза ( о-дифенол: кислород - оксидоредуктаза, 1.10.3.1), или полифенолоксидаза, или тирозиназа, действует на о-двфенолы, полифенолы, дубильные вещества и монофенолы, в частности на тирозин. Конечными продуктами реакции являются хиноны. [43]
Для того чтобы проверить гипотезу Гоннермана о гидролитических свойствах тирозиназы, Шода и Штауб-6 действовали тирозиназой на тирозин в течение одного часа в атмосфере углекислоты, но им не удалось получить даже качественно ускорения действия тирозиназы при последующем впуске воздуха. Он нашел, что предварительная обработка тирозиназы тирозином в атмосфере водорода при 25 в течение 24 часов не оказывает никакого влияния на скорость последующего окисления смеси. Кипяченая смесь не окисляется ни кислородом воздуха, ни системой пероксидаза - перекись водорода. Бах нашел далее, что эквимолекулярные смеси продуктов, которые могут образовываться при гидролитическом распаде тирозина в у - и р-положении ( фенолсерин или гидрохиноналанин, паракрезолоксиаминуксусная кислота или параоксибензиловый спирт - гликоколь), не подвергаются действию ни тирозиназы, ни системы пероксидаза - перекись водорода. Гипотеза Гоннермана о гидролитическом расщеплении тирозина тирозиназой не имеет, таким образом, никакого экспериментального основания. [44]
Раствор тирозина, насыщенный при нагревании и охлажденный до 40, взбалтывается на воздухе с активной тирозиназой. Он окрашивается при этом в течение 5 - 10 мин. Красный раствор обесцвечивается затем кипячением, охлаждается и смешивается с пе-роксидазой и перекисью водорода. В зависимости от отношения концентраций, полученное окрашивание колеблется от светлокоричневого до черно-фиолетового. Избыток перекиси водорода обесцвечивает продукт реакции, так же как перманганат калия в кислом растворе. [45]