Изоэлектрическая точка - белок
Cтраница 2
Микрометод является прекрасным методом для опре - деления изоэлектрической точки белка. Изоэлектриче-ская точка имеет большое значение в химии белков. В этой точке свободный заряд на частице равен нулю, и при таком рН белок имеет минимальную растворимость. Частицы стекла микроскопически видимых размеров; помещаются в концентрированный раствор белка ( 1 - 2 %) и полностью покрываются белком в течение нескольких минут. Суспензия частиц стекла затем разбавляется соответствующим буфером; разбавленная суспензия помещается в кювету для микроэлектрофореза и определяется подвижность. Через эти точки проводится наилучшая линия и затем она интерполируется на нулевую подвижность. Значение рН, при котор м подвижность равна нулю, есть изоэлектрическая точка белка. [16]
Легко видеть, что если s п, то изоэлектрическая точка белка не изменится, но произойдет щелочное смещение изоионной точки; напротив, если п О, то изоионная точка не изменится и произойдет лишь кислое смещение изоэлектрической точки. Во всех случаях неодинаковой адсорбции ионов солей изоточки белка расходятся между собой. [17]
Очевидно, что в буфере с рН, равным изоэлектрической точке белка, последний электронейтрален и двигаться в электрическом поле не будет. [18]
Изменения числа реактивных групп при денатурации проявляются и в изменении изоэлектрической точки белков. [19]
Обычная процедура высаливания состоит в предварительном доведении рН раствора до изоэлектрической точки осаждаемого белка, ибо в изоэлектрическом состоянии растворимость белков минимальна. Затем к перемешиваемому белковому раствору добавляют насыщенный раствор соли ( или твердую соль) до тех пор, пока не появится легкая опалесцен-ция. После этого раствор оставляют при комнатной температуре или в рефрижераторе. Если концентрация солей очень высока, часто можно работать при комнатной температуре, так как в этих условиях размножение бактерий резко заторможено. Для осаждения белков чаще всего употребляют сернокислый натрий или сернокислый аммоний. Так, например, если доведенные до изоэлектрической точки растворы сывороточного или яичного альбумина обработать сульфатом аммония [9] или сульфатом натрия [10], то происходит медленное образование кристаллов альбумина, которые оседают на дно сосуда. Образование кристаллов обусловлено медленным испарением раствора. При избытке соли образуется аморфный осадок белка. [20]
При смешивании раствора белка с буферной смесью, рН которой соответствует изоэлектрической точке белка, частицы белка изменяют свой заряд, становятся электронейтральными и, следовательно, неустойчивыми в растворе. Добавление водоотнимающих средств, например спирта, ацетона, вызывает дегидратацию белковых частиц и способствует выпадению белка в осадок. [21]
 |
Характеристические вязкости белков в водных растворах солей. [22] |
Большинство из этих результатов было получено при 20 или 25 С, вблизи изоэлектрических точек белков в водных растворах, содержащих относительно высокую концентрацию нейтральной соли. Эти же белки имеют отношения / / / мин. [23]
Наиболее выраженная коагуляция ( помутнение) произойдет в пробирке с буфером, рН которого соответствует изоэлектрической точке белка. [24]
При сильном подкислении в темноте суспензии хлоропластов наблюдается увеличение светорассеивания, так как понижение рН до изоэлектрической точки белков приводит к их сжатию и повышению коэффициента отражения света, по сравнению с окружающей средой. [25]
Все приведенные данные были получены в водных солевых растворах при температурах, близких к комнатной, и около изоэлектрических точек белков. В этих условиях, как отмечалось выше, возможная ошибка, обусловленная эффектами электрического заряда и присутствием третьего компонента, должна быть совсем мала. [26]
При денатурации белка обычно утрачивается не только его способность к растворению в воде при реакции, близкой к изоэлектрической точке белков, но одновременно изменяется и ряд его других химических особенностей и специфических биологических свойств ( например, теряется ферментативная активность у белков-ферментов, см. главу Ферменты), характеризующих природный ( нативный) белок. [27]
При денатурации белка обычно утрачивается не только его способность к растворению в воде при реакции, близкой к изоэлектрической точке белка, но одновременно изменяется и ряд его других химических особенностей и специфических биологических свойств ( например, теряется ферментативная активность у белков-ферментов, см. главу Ферменты), характеризующих природный ( нативный) белок. [28]
 |
Относительная обменная емкость сорбции белков на карбоксильном катионите Биокарб - Т в зависимости от рН раствора. [29] |
Экспериментальные данные по сорбции различных белков на высокопроницаемых гетеросетчатых карбоксильных биосорбентах приведены на рис. 3.53. Расположение максимума на кривых коррелирует с изоэлектрическими точками белков. [30]
Страницы: 1 2 3 4