Cтраница 2
Ионы некоторых тяжелых металлов, присутствующие в препаратах очищенных ферментов, часто играют важную роль, выступая в качестве кофакторов. Примером такого фермента является ксантиноксидаза молока крупного рогатого скота. [16]
Аналогично в качестве реагентов для кинетического расщепления были использованы очищенные ферменты. Следует отметить некоторые особенности таких расщеплений, которые могут ограничивать их применимость. [17]
Различные оптически деятельные спирты были получены при помощи некоторых очищенных ферментов или вполне определенных ферментных систем, образуемых живыми тканями при искусственно созданных условиях. [18]
Суть ферментной инженерии состоит в иммобилизации ( закреплении) индивидуальных очищенных ферментов на специальных носителях и в модификации ферментов, что позволяет устранить такие недостатки природных ферментов, как необходимость использования их в растворе, при температурах не более 30 - 85 С и других мягких условиях. [19]
Приведенная выше цепь последовательных реакций была подтверждена результатами опытов с очищенными ферментами, причем были обнаружены дополнительные промежуточные продукты. Первый этап превращения тирозина состоит в образовании n - оксифенилпировиноградной кислоты путем реакции переаминирования. Интересно, что в более ранних исследованиях с использованием кашицы печени не наблюдали образования аммиака при окислении тирозина. [20]
Модифицируя этот метод разделения рацематов в более удобную форму, а именно используя очищенный фермент, можно устранить недостатки, связанные с применением живых систем. Так, амины можно разделить, превращая их в М - этано-илпроизводное с последующим ферментативным гидролизом рацемического амида. [21]
Выражается числом молей продукта, образовавшегося за 1 мин, на 1 моль очищенного фермента. Хотя возможность определения каталитической константы непосредственно следует из уравнения ( VI. Если молекулярный вес фермента неизвестен, то каталитическую константу часто рассчитывают на 100 000 г фермента. [22]
Во всяком случае, абсорбционные полосы этих соединений не появляются в абсорбционном спектре очищенного фермента, имеющем пик около 280 ммк. [23]
Хотя мы, как правило, будем рассматривать только одну ферментативную реакцию и большинство исследований механизмов проводится на очищенных ферментах, важно помнить, что реально ферменты действуют в таких условиях, когда одновременно протекают сотни химических реакций. Контроль этой огромной сети несвязанных и взаимосвязанных реакций достигается механизмами, регулирующими концентрации и эффективность индивидуальных ферментов. Эти механизмы контроля ( см. ниже, разд. Большинство ферментов катализируют одну и только одну реакцию одного и только одного субстрата, поэтому отдельные стадии определенных путей метаболизма могут контролироваться посредством контроля активности отдельных ферментов. [24]
Делеано, между прочим, отмечает то не лишенное интереса обстоятельство, что способностью к регенерации обладает только не очищенный фермент; если же раствор пер-оксидазы очистить при помощи коллоидальной окиси железа, то восстановления ферментативных свойств у такого очищенного раствора не наблюдается. [25]
В то же время одним из основных условий, позволяющих впоследствии судить о том или ином виде специфичности, является обязательность применения очищенных ферментов и субстратов. [26]
При изучении реакций и процессов, происходящих в живой клетке, не всегда можно использовать результаты исследований, полученные при работе с очищенными ферментами. Длительное время оставалось неясным, каким образом в живой клетке находятся в близком соседстве, не приходя во взаимодействие, ферменты и вещества, на которые они могут действовать. Очевидно, в клетке имеется какое-то пространственное разделение ферментов и веществ, поэтому они не взаимодействуют друг с другом. [27]
Осадок растворяют в 100 мМ буферном растворе трйс - НС1 ( рН 7 1; 2 5 мМ ЭДТА; 10 мкМ ДТТ) и диализуют против буферного раствора. Очищенный фермент в отсутствие ЭДТА и ДТТ инакти-вируется. [28]
Енолаза катализирует дегидратацию 2-фосфоглицериновой кислоты; в результате этой реакции фосфорный эфир, обладающий малым запасом энергии, превращается в макроэргическое соединение. Очищенный фермент из гороха для проявления активности требует присутствия магния. Енолаза чувствительна к действию фторидов. Исследование очищенной енолазы, полученной из животных тканей, показало, что она представляет собой одиночную пептидную цепь, в которой отсутствуют цистеин и цистин. [29]
Преимущества этих методов заключаются в их простоте, быстроте проведения, потреблении незначительных количеств испытуемых веществ и реагентов, возможности работы в широком интервале температур. При использовании очищенных ферментов и хранении в сухом месте такие индикаторные бумаги хорошо сохраняются. [30]