Cтраница 4
При таких исследованиях важно убедиться в ферментативной гомогенности полисахаразы. Наличие примесных карбогидраз и ттгранс-глюкозидаз может приводить к аномальным результатам. Причиной артефактов может также быть присутствие полисахараз. В случае смеси двух очищенных ферментов было обнаружено синэргическое действие, нричем специфичность одного из ферментов изменялась. Так, Уилен нашел, что гликоген и амилопектин расщепляются смесью R-фермента и а-амилазы с образованием глюкозы. Ни один из ферментов, действуя самостоятельно, не выделяет глюкозы из панозы, гликогена или амилопектина. [46]
Этот фермент, названный аланинрацемазой, был найден затем в клетках других микроорганизмов, в том числе у Leuconostoc mesenteroides, Escherichia coll, Bacillus subtllis и Pseudomonas fluorescens. Установлено, что добавление пирид-оксальфосфата значительно активирует очищенный фермент, тогда как пиридоксаминфосфат подобного действия не оказывает. Пировиноградная кислота в ходе реакции рацемизации не образуется. Скорость ферментативного превращения каждого из оптических изомеров аланина в рацемат одинакова. Фермент строго специфически катализирует реакцию рацемизации аланина; другие аминокислоты, например а-аминомасляная кислота, цистеин, серии, лейцин, треонин, пролин, оксипролин, лизин, аргинин, гистидин, тирозин, триптофан, аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота, не подвергаются рацемизации. Участие витамина В6 в действии рацемазы послужило поводом к изучению неферментативных реакций рацемизации с участием пиридоксаля. Эти исследования привели к выводу, что механизм реакции рацемизации заключается в образовании шиффова основания из пиридоксаля и аминокислоты; при обратимых таутомерных превращениях этого промежуточного комплекса временно возникает двойная связь между а-углеродным атомом и азотом аминогруппы ( стр. [47]
Для обеспечения НАДФН-нитратредуктазной диссимиляции требуются железо и молибден. В этом отношении фермент из указанного источника аналогичен нитратредуктазе из денитрифицирующих бактерий. Однако большинство очищенных ферментов не меняли свою активность в присутствии хелатирующих железо реагентов, содержали тем меньше железа, чем хуже были очищены препараты, и в них не были обнаружены цитохромы или флавин. НАДФН не является эффективным донором электронов для очищенного фермента, тогда как бензилвиологен ( N, М - дибензил-4 4 -ди-пиридил) может выступать в этом качестве. Эти наблюдения согласуются с гипотезой, согласно которой НАДФН-нитратредуктазная активность обеспечивается двумя ферментами [78]: один из них - ФАД-зависимая НАДФН-диафораза, которая может использовать в качестве акцепторов электронов многие вещества, в том числе окисленный цитохром с; другой фермент - это собственно концевая нитратредуктаза, молибденсодержащий белок, использующий в качестве доноров электронов восстановленные флавин-нуклеотиды. [48]