Cтраница 4
Все природные белки строятся, как правило, из двадцати канонических аминокислотных остатков, приведенных в табл. 2.1. Из них 19 - действительно аминокислотные остатки, но Про - остаток иминокислотный, соответствующий иминокислоте про-лину. Остатки цистеинила ( Цис-SH) в белке часто попарно соединяются друг с другом ковалентной дисульфидной связью, образуя Цис-S - S-Цис. [46]
Аминокислоты, поступающие из кишечника в кровь, используются в органах и тканях на построение тканевых белков, ферментов, гормонов, пигментов, пуриновых и пиримиди-новых оснований, азотистых экстрактивных веществ и др. Аминокислоты, оставшиеся не использованными, а также освободившиеся в результате распада тканевых белков, подвергаются окислительному дезаминированию под влиянием оксидазы 1-аминокислот ( флавопротеид - ФМН) с образованием промежуточного продукта - иминокислоты. [47]
Каждая аминокислота дает пик, близкий к гауссову распределению. Иминокислоты ( пролин, гид-роксипролин) дают производные, у которых максимум поглощения лежит при 440 нм; следовательно, необходим дополнительный спектрофотометр с выходом на второй конец самописца. Площади пиков можно определять вручную или же вводить данные либо в интегратор, либо в небольшую вычислительную машину. Кроме того, раствор содержит восстанавливающий агент, такой как хлорид олова ( II) или гидринданхин. Последний предотвращает побочные окислительные процессы, которые влияют на точность анализа. Аминокислоты дают несколько различающиеся спектрофотометрические выходы, поэтому для проверки точности анализа всегда используют стандартную смесь аминокислот. Чувствительность анализа примерно 1 нмоль. Сделаны попытки повысить чувствительность с помощью спектрофлуорометрических методов анализа. Одним же из потенциальных реагентов является 4-фенилспиро [ фуран-2 ( ЗЯ), l - фталан ] дион-3 3 ( 3) ( флуореска-мин), который не флуоресцирует. Последние возбуждаются при 390 нм и имеют максимум поглощения при 475 нм. Несмотря на то, что относительное повышение чувствительности по сравнению со спектрофотометрическими методами на первый взгляд выглядит привлекательным, реагент ( 3) весьма дорог, а аминокислоты не дают флуоресцирующих продуктов до тех пор, пока величина рН кислого элюата не будет доведена до необходимого значения. Альтернативным реагентом для спектро-флуорометрии является о-фталевый ангидрид, однако он также обладает двумя упомянутыми недостатками. [48]