Фосфодиэстераза

Cтраница 1

Фосфодиэстеразы катализируют гидролитическое расщепление эфирных связей между остатками ортофос-форной кислоты, в результате чего возникают фосфомо-ноэфир и спирт. [1]

Активность фосфодиэстеразы с низкой Кт при добавлении протекторов in vitro изменялась незначительно. Добавление в концентрации ( 5 - 10 - 4 М) серотонина, гистамина и дофамина к грубой мембранной фракции тканей крыс приводило к активации аденилатциклазы. [2]

Активация фосфодиэстеразы при действии комплекса Са2 - КМ сопровождается увеличением величины I / max от 3 до 50 раз и уменьшением эффективной константы сродства фермента к субстрату не более чем в 5 раз в зависимости от способа очистки и времени хранения фермента. Взаимодействие антагонистов кальмодулина возможно не только с каль-модулином, но и с фосфодиэстеразой, однако последний эффект обычно не учитывают, так как он появляется при значительно более высоких концентрациях антагонистов, чем первый. [3]

Например, фосфодиэстераза змеиного яда вызывает постепенный гидролиз s - PHK с того конца молекулы, к которому присоединяется аминокислота. При этом 40 % - ный гидролиз приводит к тому, что гипохромный эффект уменьшается на 90 % в результате почти полного удаления одного витка спирали. Кроме того, s - PHK значительно более чувствительна к рибонуклеазе и полинуклеотид-фосфорилазе ( стр. [4]

Измеряют активность фосфодиэстеразы в присутствии Са2 и кальмодулина на профиле элюции фермента при повторной хроматографии на ДЭАЭ-ТСК. Фракцию с максимальной активностью отбирают для дальнейшего использования в экспериментах. Хранят при температуре 4 С. [5]

Из ингибиторов фосфодиэстеразы при бронхиальной астме применяют гл. [6]

Выделены и охарактеризованы растворимая кальмоду-линзависимая фосфодиэстераза и мембраносвязанная изоформа, не регулируемая Са2 и кальмодулином. [7]

Пользуясь высокими концентрациями очищенной фосфодиэстеразы змеиного яда, можно обнаружить, что продукты гидролиза РНК представлены преимущественно нуклеозид-5 - фосфатами, но среди них обнаруживаются и пиримидиновые нуклео-зиддифосфаты. Если левый конец цепи заканчивается пуриновым нуклеотидом, а правый - пиримидиновым, то гидролиз фосфодиэстеразой яда 3 -фосфатных связей приведет к образованию пуринового нуклеозида из левой концевой группы и пири-мидинового нуклеозид-3 5 -дифосфата из правой концевой группы. Таким способом количественно и качественно определяют концевые группы и устанавливают длину полинуклеотидной цепи. Существуют и другие, более сложные методы анализа концевых групп. [8]

Дефосфорилированные олигонуклео-тпды обрабатывают фосфодиэстеразой змеиного яда в 5 - 10 мкл 0 05 М ушг-буфера с рН 9 0, содержащего 0 01 М ацетата магния. Концентрация фермента составляет 0 1 мг / мл. [9]

Экзонуклеазы [1, 2], или фосфодиэстеразы ( К. [10]

Смесью микрококковой нуклеазы н фосфодиэстеразы селезенки исследуемую ДНК ( 1 мкг) полностью гидролизовали до З - мононуклеотидов. Затем для последующей локализации пятен и количественных определений мононуклеотиды метили 32Р путем фосфорилирования по 5 -положению рибозы с помощью Т4 - полинук-леотидкиназы и [ у-32. АТР в неорганический фосфат) наносили в угол пластинки PEI-целлюлозы ( 20 X 20 см), которую предварительно вымачивали в течение 30 мин в 0 1 М HCOONH4 ( pH 3 5), а затеи сушили. [11]

Электрофоретические подвижности некоторых нуклеотидов в системе 5 % - ная уксусная кислота - 0 5 % - ный пиридин - О. ОО1 U EDTA ( pH 3 5. [12]

Целесообразность использования частичного гидролиза фосфодиэстеразой селезенки при анализе последовательности обсуждается в гл. Условия проведения этой операции несколько различаются в зависимости от того, выделен ли олигонуклеотид из панкреатического, Т, - или [ 2 -гидролиза-та главным образом вследствие того, что скорость отщепления концевых нуклеотидов при помощи фосфодиэстеразы селезенки неодинакова: UA G С. [13]

Подобная обратимость доказана в катализируемой фосфодиэстеразой селезенки реакции замещения бензильнои группы в цитидин-3 ( или аденозин-3) - бензилфосфате на метильную или этильную группы Гидролиз ферментом селезенки не проходит через 2 3 -циклофосфат ( такие синтетические промежуточные соединения превращаются в 2 -фосфаты), но и здесь реакция является скорее прямой переэтерификацией, чем синтезом. [14]

Вместе с тем под действием фосфодиэстеразы змеиного яда в результате разрыва связей ( С-3) - О - Р в положении, отмеченном буквой р, образуются нуклеозид-5 - фосфаты ( см. гл. [15]

Страницы: 1 2 3 4