Фосфодиэстераза

Cтраница 4

Удельную радиоактивность четырех 2 ( 3) - или 5 -нуклеотидов определяют следующим образом: смесь нуклеотидов, полученную после гидролиза щелочью или фосфодиэстеразой змеиного яда и фракционирования электрофорезом при рН 7 4, разделяют электрофоретически на индивидуальные компоненты при рН 3 5 ( см. выше); затем определяют их радиоактивность и оптическую плотность. В пределах ошибки опыта нуклеозиды имеют ту же удельную радиоактивность, что и нуклеотиды, однако активность оснований составляет только 20 - 30 % от этой величины. [46]

АДФ-рибозы; 2 - гликогидролаза поли - АДФ-рибозы, расщепляющая гликозидную связь ( 1 2) с высвобождением мономерных единиц АДФ-рибозы; з - фосфодиэстераза, расщепляющая пирофосфатную связь с высвобождением фосфорибо-зил - АМФ; 4 - гипотетический фермент, расщепляющий связь 1-го остатка АДФ-рибозы с белком-акцептором. [47]

Последовательность оснований в олигонуклеоти-дах из Т - - РНК-азного гидролизата чаще всего устанавливают при помощи гидролиза щелочью или панкреатической РНК-азой или же частичным гидролизом фосфодиэстеразой селезенки. Аналогично структуру олигонуклеотидов из панкреатического РНК-азного гидролизата можно определить, проводя гидролиз щелочью или Т1 - РНК-азой или же частичным гидролизом фосфодиэстеразой селезенки. Все опыты выполняют в микромасштабе, в объеме 5 - 10 мкл, так что пробы можно прямо подвергать электрофорезу или хроматографии. Так, неизвестный олигонуклеотид из T - j - РНК-азного гидролизата делят на три порции: первую обрабатывают щелочью, вторую - панкреатической РНК-азой, а третью подвергают частичному гидролизу фосфодиэстеразой селезенки. Продукты щелочного гидролиза разделяют электрофорезом на бумаге ватман 54, а продукты расщепления панкреатической РНК-азой - на DEAE-бумаге. Определение нуклеотидного состава в щелочном гидролизате осуществляют простым сравнением положений радиоактивных пятен с известными положениями мононуклеотидов и определением относительной радиоактивности каждого пятна. Продукты нуклеазного гидролиза с короткой цепью часто удается идентифицировать лишь по их положению на электрофореграмме. [48]

Причиной отмеченных изменений является стимуляция гуанилатциклазы ( в 1 7 раза через 30 мин, в 2 4 раза через 60 мин), а активность фосфодиэстеразы цГМФ только через 1 ч после облучения на 50 % превышает исходный уровень. [49]

На несколько минут давался импульс ортофосфата с Р32, затем дрожжи убивались, извлекалась РНК, проводился полный ее гидролиз до мононуклео-тидов с помощью щелочи или фермента ( фосфодиэстеразы змеиного яда), осуществлялось разделение нуклеотидов и измерение радиоактивности каждого из них. [50]

Так, при действии щелочи в виде нуклоозида будет освобождаться З - концевое звено ( связанное с полинуклеотидом через 5 -гидрок-сил; правый конец), а при действии фосфодиэстеразы змеиного яда - 5 -концевое звено ( связанное с полинуклеотидом через З - гидроксил; левый конец) ( фиг. [51]

Во втором опыте ( пятна обозначены пунктирной линией) разделяли смесь четырех нуклеозиддифос-фатов, полученных следующим путем: ДНК гидролизовали микрококковой нуклеазой, из гидролизата выделяли динуклеотиды и гидролизовали их фосфодиэстеразой змеиного яда. В этих опытах положения Д - фТф и д-ф Цф на хроматограммах воспроизводились очень хорошо. Положения идентичных компонентов из двух разных гидролизатов очень хорошо совпадают. [52]

Модель Корвберга, поясняющая рааветвленвость ДНК, синтезируемой in vitro, и ее неспособность к денатурации. [53]

Еще более усложняется механизм регуляции транскрипции у эукариотов в связи с активацией фосфорилирующего фермента второй системой матричной регуляции, зависимой от цАМФ, с одной стороны, и стимуляцией метилирующего фермента АМФ, Образующимся из цАМФ при участии цАМФ - фосфодиэстеразы - с другой. Именно среди негистоновых белков и обнаружен этот фермент. [54]

Исследование, проведенное с использованием в качестве субстратов различных синтетических нуклеотидо - ( Р - - Ы) - аминокислот ( пептидов), показало, что гидролитические ферменты, расщепляющие пептидные или фосфодиэфирные связи ( проназа, панкреатическая РНК-аза, фосфодиэстераза), не расщепляют фосфоамидную связь в этих соединениях. [55]

Страницы: 1 2 3 4