Фосфодиэстераза

Cтраница 2

Яды различных видов змей содержат фосфодиэстеразу, которую обычно используют для получения нуклеозид-5 - фосфатов. [16]

Это было подтверждено гидролизом олигонуклеотида под действием фосфодиэстеразы селезенки с образованием трех Ср и одного А. Если не считать этого примера, использование спектров ДОВ и КД Для структурного анализа тетрамеров или более коротких олигонуклеотидов было практически полностью вытеснено методами фингерпринтов, описанными в гл. Можно напомнить, что для надежного определения последовательности достаточно подвергнуть неизвестный олигонуклеотид частичному гидролизу при помощи фосфодиэстеразы селезенки с последующим электрофорезом на DEAE-целлюлозе. Несмотря на то что в ходе определения исходное вещество разрушается, для анализа требуется очень небольшое количество радиоактивного олигонуклеотида. [17]

Инозиттрифосфат сквобож-дается из мембранного фосфатиднли-нозитдифосфата под действием специфической фосфодиэстеразы, когда стимулируются Са-мобилизуюшие рецепторы. Он мобилизует Са2 из немито-хондриальных внутриклеточных источников. [18]

Из своего опыта [22] мы знаем, что фосфодиэстераза селезенки обладает некоторой эндонуклеазной активностью, что также приводит к ошибочному определению концевых остатков. Описанный выше метод достаточно надежен при анализе коротких олигомеров ( до гекса-нуклеотидов), однако его нельзя рекомендовать для длинных олигомеров, содержащих 20 и более нуклеотидных остатков. [19]

С достаточно высока гидролиз соответствующих олигонуклеотидов при помощи фосфодиэстеразы селезенки следует вести более продолжительное время. [20]

Стрелка указывает возможный путь развития, соответствующий повышению концентрации фосфодиэстеразы ( s), наблюдаемому после начала голодания. Переход из области л в области В и С соответствует наблюдаемым изменениям в поведении: клетки сначала неспособны, реагировать на сигналы - внеклеточную цАМФ, затем начинают передавать сигналы дальше и, наконец, обретают способность автономно синтезировать цАМФ в периодическом режиме. Центры колоний являются клетками, для которых параметры k и s быстрее достигают точки внутри области С после начала голодания. [21]

Содержание ( в п / моль на 1 мг белка цАМФ и цГМФ в отделах мозга нормальных и облученных крыс. [22]

Так, имидазол ( 40 мМ) повышает активность фосфодиэстеразы с низкой Кт на 28 % у контрольных и на 72 % у облученных ( через 24ч) животных. Теофиляин ( 1 - 10 - 3 М), тиопентал ( 1 - 10 - 6 - 1 - 10 - 3 М) и кофеин ( 5 - 10 - 4 - 1 - Ю 2 М) в значительно большей степени ингибируют фосфодиэстеразу ( с низкой Кт) у крыс, подвергнутых действию радиации. Эти результаты могут объяснить причины изменения действия некоторых лекарственных веществ в облученном организме. Например, показано, что кофеин ( 50 и 80 мг / кг) сокращает длительность плавания нормальных крыс, но увеличивает ее у облученных особей. Эти данные объяснимы, если учесть повышенную чувствительность фосфодиэстеразы мозга в пострадиационный период к действию кофеина [ Петков В. [23]

Привлекают внимание многочисленные радиобиологические эксперименты с кофеином, являющимся ингибитором фосфодиэстеразы. На Т - клетках почки человека показано, что кофеин ( 1 мМ) при добавлении в среду до и после облучения уменьшает индуцированную радиацией задержку митоза в стадии Ga. Подобным действием обладает МЭА, но при добавлении в среду только до облучения, менее эффективны теофиллин и теобромин. На синхронизированных культурах Physarum polycephalum, облученных в дозе 30 Гр, было продемонстрировано, что модификаторы уровня цАМФ по-разному влияют на задержку деления клеток: кофеин, теобромин и теофиллин уменьшают, дб-ц АМФ, холерный токсин, 1-метил - З - изобутилксантин и параверин не влияют, a RO-20-1724 увеличивает задержку деления. [24]

При тотальном облучении крыс в дозе 190 мКл / кг активность фосфодиэстеразы цАМФ с высокой Кт ( 1 - 10 - 4 М) He-изменяется в течение 7 сут. В то же время активность фосфодиэстеразы с низкой Кт ( 1 - 10 - 6 М) была снижена через 24 ч на 40 %, а к 7 - м суткам возвращалась к исходному уровню. Следует напомнить, что компартментализация действия цАМФ в клетке регулируется фосфодиэстеразой с высокой и низкой Кт. Таким образом, при угнетении фосфодиэстеразы с низкой Кт могут увеличиться локальная концентрация цАМФ и активироваться цАМФ - зависимое фосфорилирова-ние мембранных белков. К сожалению, активность аденилатциклазы головного мозга при облучении в минимально летальных дозах не исследована, и судить о постоянной концентрации цАМФ в ткани трудно. [25]

Все ферменты, гидролизующие полинуклеотидные цепи, можно отнести к числу фосфодиэстераз, поскольку они разрушают фос-фодиэфирные межнуклеотидные связи. [26]

Он состоит в ферментативном расщеплении РНК до нуклеозидов под действием смеси фосфодиэстеразы змеиного яда и щелочной фос-фомоноэстеразы из Escherichia coli. Смесь нуклеозидов разделяют далее с помощью распределительной хроматографии на целите. Мягкость условий расщепления полимера сочетается здесь с высокой эффективностью разделения мономеров, что и позволило обнаружить целый ряд неизвестных ранее редких компонентов РНК. [27]

Лучшие результаты дают ферментативные методы гидролиза, в том числе использование фосфодиэстеразы змеиного яда, рибо-нуклеазы и других ферментов. Совокупность химических и ферментативных методов однозначно показывает, что и в ДНК, и в РНК полинуклеотидные цепи построены однотипно за счет 5 - З - фос-фодиэфирных связей между каждыми двумя соседними нуклеоэид-ными звеньями. [28]

Синтезированная цАМФ транспортируется через мембрану во внеклеточную среду, где расщепляется фосфодиэстеразой - ферментом, выделяемым амебами. [29]

После обработки ДНК карбодиимидом СП, а затем панкреатической ДНК-азой и фосфодиэстеразой змеиного яда удается выделить длинные олигонуклеотиды, возникающие из дефектных участков полимера. [30]

Страницы: 1 2 3 4