Фракционирование - белок
Cтраница 1
Фракционирование белков, нуклеиновых кислот и других макромолекул при центрифугировании в градиенте плотности сахарозы основано на различии в скорости седиментации молекул, пропорциональной их молекулярной массе. Фракции РНК, обладающие различной молекулярной массой, после центрифугирования распределяются в линейном градиенте концентрации сахарозы; при этом благодаря значительной вязкости растворов сахарозы улучшается разделение и уменьшается возможность смешивания различных фракций. [1]
Фракционирование белков на гидроксиапатите [23, 24] или геле фосфата кальция [25] является особой разновидностью ионообменной хроматографии. Микрокристаллические частицы ГА состава Саю ( РО4) б ( ОН) 2 или гель фосфата кальция фиксированы обычно на инертном носителе, например целлюлозе. На прочность связывания положительно заряженных группировок оказывают сильное влияние неорганические соли; прочность связывания отрицательно заряженных групп практически не зависит от концентрации солей. Кроме того, сорбция в присутствии солей зависит и от молекулярной массы белка. [2]
Фракционирование белков и других полярных полимеров основано на комбинации осаждающего действия от добавления спирта и уменьшения растворимости при понижении температуры. Снижение растворимости вызывает также коацервацию - расслоение раствора на два слоя, резко различающиеся содержанием полимера. Раствор, более богатый высокомолекулярным веществом, выделяется в виде капель-коацерватов. Коацерваты всегда возникают в условиях перехода к взаимно ограниченной растворимости компонентов. Коацервация играет важную роль в живых организмах. [3]
Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе рекомендуется проводить путем создания ступенчатой элюции. Это обусловлено достаточно большими различиями в сродстве отдельных белковых фракций к иониту. При таком значении рН белки сыворотки крови сорбируются на слабых катионитах. [4]
Для фракционирования белков фирма LKB недавно начала выпуск крупнопористых слабых ионообменников типа 2133 UltroPak TSK 545 DEAE и TSK 535 СМ. Для той же цели фирма Beckman недавно начала выпуск аналогичных слабых ионообменников: Spherogel TSK IHX 530ВЕАЕ и... [5]
 |
Схема устройства для колоночной хроматографии. [6] |
Для фракционирования белков применяется главным образом хроматография на колонках. [7]
Для фракционирования белков используют ионообменники на основе целлюлозы, сшитого декстрана, агарозы с полиакри-латом, реже на основе полиакриламидных гелей. [8]
Для фракционирования белков сыворотки крови человека и животных обычно используют буфере рН8 6 ( сравните с их изоэлектрическими точками по табл. 37); при этом белки заряжаются отрицательно и движутся к аноду. [10]
Техника фракционирования белков на колонках обычно следующая. Белок ( фермент и сопутствующие ему протеины), адсорбировавшийся вверху колонки, элюируют растворами, чаще всего содержащими возрастающие количества солей. При этих изменениях раствора, проходящего через колонку, сродство к адсорбенту фермента и иных белков все время снижается. Белки постепенно смываются, переходят в раствор, вытекающий из колонки. При помощи автоматического коллектора фракций его собирают небольшими порциями. [11]
Для окончательного фракционирования белков используют также электрофорез, в основе которого лежит разделение кислых и основных молекул белков по их заряду в электрическом поле. [12]
О фракционировании белков на этих обменниках пока не сообщалось, но можно думать, что такие данные в недалеком будущем должны появиться. [13]
При фракционировании белков обычно применяют иониты, содержащие карбоксиметильную и диэтиламиноэтильную функциональные группировки, однако эти иониты не вполне подходят для разделения пептидов. Как правило, почти все кислотные пептиды адсорбируются на катионите при рН 3 0 - 3 5 в буферном растворе с низкой ионной силой, откуда могут быть элюи-рованы при рН 6 - 9 и при более высокой ионной силе. Карбо-ксилсодержащие иониты слабо диссоциированы при рН 3, и, следовательно, обладают пониженной емкостью. Скачкообразное изменение рН элюента приводит на практике к одновременному элюированию группы пептидов. [14]
При фракционировании белков водного экстракта мышц пользуются метиловым спиртом, осаждение ведут при 1 С. [15]
Страницы: 1 2 3 4