Фракционирование - белок
Cтраница 3
Широко распространенным методом этого типа является фракционирование белков плазмы крови по Кону. Высокая эффективность, воспроизводимость и практичность этого метода позволяют использовать его не только в условиях лаборатории, но и для промышленного получения высокоочищенных препаратов белков плазмы крови. Однако схема очистки по этому методу сложна, и описание ее выходит за рамки настоящего руководства. Примером более простого метода, в котором используются органические растворители, является фракционирование основных белков ядер - гистонов - из ткани тимуса по Джонсу. [31]
На рис. 124 представлен хроматографический профиль фракционирования белков яда Crotalus atrox на том же самом анионообменнике. На профиле, полученном за 20 мин, можно хорошо различить не менее 10 белковых пиков. [33]
Довольно успешно ионообменную хроматографию применяют и для фракционирования белков рибосом. Большинство этих белков также имеет щелочной характер, но они крупнее гистонов, поэтому здесь предпочтение отдается СМ-целлюлозе. Белки рибосом весьма склонны к агрегации, что заставляет вести их хроматографи-ческое фракционирование в присутствии 6 М мочевины. [34]
Иониты этого типа находят широкое применение при фракционировании белков и крупных пептидов. Последние часто хро-матографируют в присутствии 8 М мочевины или 6 М гуанидин-хлоргидрата. При выборе ионита и условий элюирования руководствуются общими правилами, применяемыми при разделении белков ( гл. [35]
Этот метод еще не нашел широкого применения для фракционирования белков, хотя все данные говорят о том, что основным его преимуществом является высокая скорость процесса. [36]
Обсуждая влияние солей, следует отметить, что фракционирование белков основано на гидрофобной высаливающей адсорбции на неионных амфифильных гелях, для которой Порат и др. [40] ввели термин гидрофобная высаливающая хроматография. Ам-фифилыные гели получаются при введении ограниченного числа гидрофобных групп в вещества, которые используются как гидрофильные гели, при этом образуются сшитые полимеры, обладающие высокой проницаемостью и способные набухать как в воде, так и во многих органических растворителях. В водных растворах они проявляют сродство к растворенным гидрофобным веществам и соединениям с гидрофобными группами. Следовательно, неионные амфифильные гели демонстрируют чистое гидрофобное взаимодействие с гидрофобными областями на поверхности белковых молекул или других растворенных веществ вместо смешанной ио нно-гидрофобной адсорбции производных атарозы. В определенных условиях адсорбционная емкость амфифильных гелей по белкам может быть очень высока. В присутствии ЗМ хлористого натрия сорбция экстракта и элюиров-ание отдельных фракций осуществляется путем повышения фН, снижения ионной силы и уменьшения полярности растворителя. После использования этой колонки более 20 раз и с 50-кратным количеством белка ( относительно сухого веса геля) гидрофобный сорбент не изменяет своих хроматографических свойств. Принцип, который лежит в основе высаливающей адсорбции, до конца не ясен. Очевидно, главной движущей силой является возрастание энтропии вследствие изменения структуры воды, окружающей гидрофобные группы. Гидрофобная хроматография может иметь преимущества в растворах с высокой ионной силой, которые используются при выделении нестабильных ферментов, например а-изопропилмалатизомеразы [4], требующих для стабилизации высоких концентраций солей. [37]
Это действие глицина и органических растворителей используется при фракционировании белков плазмы ( см. гл. При повышении диэлектрической постоянной усиливается ионизация белков, чем и объясняется повышение их растворимости. [38]
Теперь рассмотрим, каким образом в такой хроматографической системе происходит фракционирование белков. [39]
Очевидно, что метод молекулярной фильтрации применим не только для фракционирования белков, но и для освобождения белков от примесей низкомолекулярных соединений ( в том числе от солей), а также для разделения смесей аминокислот и пептидов. В этих случаях необходимо использовать марки сефадекса с малым размером отверстий в молекулярных ситах. [40]
Хроматография на молекулярных ситах находит в настоящее время широкое применение для фракционирования белков. Большинство номеров биохимических журналов изобилует описаниями экспериментов с использованием молекулярных сит. [41]
С другой стороны, мы должны признать, что усовершенствование методов фракционирования белков позволило установить присутствие в плазме большого числа новых белковых фракций. Прежние представления о том, что в плазме крови содержится только один альбумин и один глобулин, пришлось оставить и признать, что в ней имеются ос -, - и у-глобулины, причем каждая из этих фракций, в свою очередь, может быть разделена на две под-фракции и более. Путем дальнейшего усовершенствования методов можно, очевидно, получить из плазмы еще большее количество белковых фракций. Возможно, что в плазме крови вообще нет совершенно чистых однородных белков. Если это так, то безнадежны все попытки выделить совершенно однородные глобулины из плазмы крови. [42]
Но здесь мы хотели проиллюстрировать то обстоятельство, что подбор оптимального для фракционирования белков значения рН буфера элюции является делом не только очень важным, но и весьма тонким. [43]
Разработанная Поратом и Флодиным в 1959 г. [15] гель-фильтрация явилась большим достижением в развитии фракционирования белков по молекулярному весу. [44]
Карбоксиметилцеллю-лоза ( СМ-целлюлоза), СМ-сефадекс, фосфоцеллюлоза ( Р - цел-люлоза), сульфометилцеллюлоза ( SM-целлюлоза) и сульфопро-пилсефадекс ( SP-сефадекс) - типичные катионообменники, пригодные для фракционирования основных белков. Кислотно-основная емкость этих ионообменников составляет 0 1 - 4 5 мэкв. Ионообменники делят на сильные, например QAE, SP, и слабые, например DEAE, СМ. [45]
Страницы: 1 2 3 4