Фракция - белок
Cтраница 4
Одним из распространенных способов разделения белков на фракции является высаливание ( стр. Для этого применяют большей частью сернокислый аммоний в различных концентрациях. После прибавления к раствору белка ( например, сыворотки крови) сернокислого аммония до полунасыщения выпадает фракция белков, которая носит название глобулинов. Если отфильтровать глобулины и к фильтрату продолжать прибавлять сернокислый аммоний до полного насыщения, выпадает осадок, получивший название фракции альбуминов. [46]
Согласно современным представлениям, плазма циркулирующей крови содержит свыше ста белков, включая гормоны и ферменты. Возможности электрофоретических методов разделения довольно ограничены; с их помощью удается получить лишь около 20 белковых фракций. Однако иммунохимические методы, особенно имму-ноэлектрофорез, обладают большими возможностями: они позволяют идентифицировать до 30 фракций белков сыворотки. Значение иммуноэлектрофореза становится еще более наглядным, если принять во внимание, что с помощью микрометода ШейдигераИб ] можно анализировать белок в чрезвычайно малых количествах - до 5 - 10 мкг. [47]
Одним из распространенных способов разделения белков на фракции является высаливание ( стр. Для этого применяют большей частью сернокислый аммоний в различных концентрациях. После прибавления к раствору белка ( например, сыворотки крови) сернокислого аммония до п о л у н а с ы щ е н и я выпадает фракция белков, которая носит название глобулинов. Если отфильтровать глобулины и к фильтрату продолжать прибавлять сернокислый аммоний до п о л н о г о насыщения, выпадает осадок, получивший название фракции альбуминов. [48]
 |
Электрофореграмма белков fM B едней трети сыворотки бумажной полосы на. [49] |
При рН выше 7 белки сыворотки несут отрицательный заряд и поэтому перемещаются после включения тока от места нанесения по направлению к аноду. Через определенное время ток выключают и бумажку просушивают при 90 С. При этом белки подвергаются денатурации и фиксируются на бумаге. Разделившиеся фракции белка не видимы, и для того чтобы их выявить, полоску обрабатывают раствором краски, име-ющей сродство к белку. При этом белок окрашивается. Избыток краски отмывают, после чего пятна белка на бумажке становятся хорошо заметными. На проявленной элект-рофореграмме видны альбумины ( на рис. 25 обозначены буквой А), ушедшие дальше всего от места нанесения, и глобулиновые фракции, расположенные между местом нанесения и альбуминами ( ркс. [50]
Тизелиус значительно улучшил метод подвижной траницы, сделав его очень точным и изящным методом злектрофоретического изучения белков. Фактически им создан новый метод, при помощи которого можно также разделить смесь белков на чистые компоненты. Сосуд Тизелиуса состоит из нескольких пришлифованных частей, которые могут перемещаться друг относительно друга при помощи особого механического устройства. Наблюдается движение фракций белка, и когда определенная фракция оказывается в данной части трубки, ее изолируют передвижением этой секции трубки. Как л в простой U-образной трубке, раствор белка находится в нижней части сосуда. Поверх раствора белка наслаивают буфер с той же концентрацией электролита, что и в растворе белка. Между раствором белка и буфером должны получаться резкие границы. На рис. 37 изображен сосуд Тизелиуса. [51]
Исследования показали, что в сыворотке кролика этим методом определяется до 17 белковых фракций. В зоне альфа-глобулинов отмечено до 5 - 6 фракций. Затем четко выделялась мощная полоса фракций белка трансферрина. Выше располагалась группа белков гаптогло-бинов, состоящая из 4 - 5 фракций. Ближе к катоду имелась широкая полоса с нечеткими контурами, она дифференцируется как альфа-2 - макроглобулин. Выше этой фракции помещалась обычно одна фракция белков бета-2 - глобулинов. [52]
Как уже отмечалось, в липидах рыб наблюдается большое количество полиненасыщенных жирных кислот, которые легко окисляются по двойным связям с образованием насыщенных и ононенасыщенных жирных кислот. Поэтому при хранении рыб изменяется жирнокислотиый состав, уменьшается относительное содержание полиненасыщенных жирных кислот и увеличивается Аоля насыщенных и мононенасыщенных жирных кислот. Значительное содержание насыщенных жирных кислот ( масляной, валериановой и др.) вызывает неприятный запах, что ухудшает качество рыбы. Образующиеся при окислении полиненасыщенных жирных кислот гидропероксиды реагируют с некоторыми фракциями белков, вызывая их денатурацию. [53]
Диализ является удобным методом очистки коллоидных растворов от низкомолекулярных веществ. При диализе коллоидный раствор помещают в коллодиевый или целлофановый мешочек и погружают в дистиллированную или водопроводную воду. Молекулы солей, сахара и других низкомолекулярных веществ легко диффундируют через мембраны, а вещества коллоидной природы остаются в мешочке. Метод диализа с успехом также используют для разделения глобу-линовой и альбуминовой фракций белка. По мере уменьшения концентрации соли в процессе диализа глобулины выпадают из раствора в осадок, а альбумины остаются в растворе. [54]
Количество краски, связанное белковой фракцией, соответствует ( в известном приближении) количеству белка, содержащемуся в этой фракции. Поэтому для определения относительного количества белка в каждой фракции достаточно сопоставить интенсивности их окрасок. Для этой цели применяют приборы, называемые денситометрами. Денситометр при протягивании через него электрофоре-граммы вычерчивает график, показывающий интенсивность окраски каждой фракции белка, а также суммарную интенсивность окраски. При отсутствии денситометра каждую окрашенную фракцию вырезают ножницами и помещают в пробирку с раствором щелочи. Через некоторое время краска элюируется из бумаги и окрашивает раствор. Интенсивность окраски определяют на фотометре. [55]
Перед нанесением на колонку раствор белка диализуют против уравновешивающего буфера до полного удаления сульфата аммония. Для злюции фермента используют линейный градиент концентрации КС1 от 0 до 0 3 М в том же буфере. Фракции белка с ферментативной активностью объединяют и диализуют против 80 % - ного раствора сульфата аммония, содержащего 10 мМ 2-меркаптоэтанол. Фермент хранится несколько месяцев при 0 - 4 С. [56]
Необходимо остановиться на представлении о полноценности и неполноценности белков в питании. Для изучения свойств белков используются различные методы получения отдельных фракций белков из органов и тканей. Эти фракции белков действительно неполноценны как источники белкового питания. В природе не существует животных или растительных тканей, в которых полностью отсутствовали бы незаменимые аминокислоты. [57]
Страницы: 1 2 3 4