Аффинная хроматография

Cтраница 1

Аффинная хроматография отличается чрезвычайно высокой избирательностью, присущей биологическим взаимодействиям. Нередко одна хроматографическая процедура позволяет очистить нужный белок в тысячи раз. Это оправдывает затраты усилий на приготовление аффинного сорбента, что не всегда оказывается легкой задачей ввиду опасности утраты биологическими молекулами способности к специфическому взаимодействию в ходе их ковалент-ного присоединения к матрице. [1]

Хроматограммы смеси пяти оснований нуклеиновых кислот ( а и пяти нуклеозидов ( б, полученные на смоле, содержащей 8 0 ( а и 16 4 % ( б связанного тимина. [2]

Аффинная хроматография S-пептида и S-белка, образованных в результате протеолитического расщепления бычьей панкреатической рибонуклеазы, обсуждалась в разд. Выделение пептидов, содержащих свободную SH-группу, рассматривалось в разд. [3]

Аффинная хроматография основана на биоспецифическом взаимодействии компонентов с аффинным лигандом. [4]

Аффинная хроматография представляет собой особый метод, предназначенный для выделения биологически активных соединений. Метод основан на исключительном биологическом свойстве присоединять специфически и обратимо другие вещества, для которых Рейнер и Уэлч [78] ввели название аффиннанты или аффинные лиганды. В настоящее время наиболее расцространенным способом получения нерастворимых аффинных сорбентов является их присоединение к носителю путем образования ковалентных связей. Если раствор, содержащий биологически активное соединение, которое следует выделить, фильтруют через колонку, заполненную нерастворимым носителем, связанным с аффинным лигандом, то все соединения, не обладающие сродством к данному аффинному лиганду, беспрепятственно проходят через колонку, тогда как соединения, обладающие таким сродством, удерживаются в колонке, причем прочность их удерживания зависит от степени их сродства и конкретных экспериментальных условий. [5]

Аффинная хроматография [27-31] i представляет собой один из наиболее специфических методов выделения реакцион-носпособных соединений, в частности ферментов, и даже таких надмолекулярных агрегатов, как вирусы. Сорбентом в этом случае служит гель типа агарозы, к которому ковалентно присоединен подходящий лиганд, например субстрат фермента. Когда раствор, содержащий выделяемое вещество ( скажем, фермент), пропускают через колонку с соответствующим образом приготовленным сорбентом, взаимодействие этого вещества с закрепленным на сорбенте лигандом ( в данном случае фермента с субстратом) приводит к его удерживанию и, следовательно, к концентрированию. Поскольку сорбция носит обратимый характер, это вещество можно затем элюировать с колонки. Один из вариантов этого приема, который, строго говоря, уже не относится к области хроматографии, заключается в том, что иммобилизованный на геле фермент служит для непрерывного превращения растворенного в подвижной фазе субстрата. Разделение по методу аффинной хроматографии может быть основано на различного рода специфических взаимодействиях, таких, как связывание фермента с ингибитором, гормона с рецептором, антигена с антителом, а также гибридизация полину-клеотидов. Этот метод позволяет выделять даже целые клетки. [6]

Аффинная хроматография, или хроматография по сродству, основана на специфическом взаимодействии молекулы белка с определенным лигандом. Готовят матрицу, с которой сшивают соединение ( лиганд), обратимо и специфично связывающийся с искомым белком. Затем через колонку пропускают смесь белков. [7]

Очистка РНК-полимора-зы из Вас. subtilis на колонке гепарин-сефарозы с элюпией линейным градиентом KG1. [8]

Аффинная хроматография на гепарин-сефарозе была использована в качестве заключительного этапа очистки этого фермента. [9]

Аффинная хроматография позволяет сократить число операций. [10]

Хроматография концентрата липазы из Rhizopus arrhizus на колонке ( 0 9X20 см с амберлитом IRC-50. [11]

Аффинная хроматография основана на способности ферментов образовывать прочные комплексы с иммобилизованными антителами, субстратами, эффекторами или ингибиторами. Прочность комплекса падает при увеличении ионной силы [69], и это свойство можно использовать для избирательной десорбции фермента. [12]

Аффинная хроматография 1251-меченого токсина из Vibrio cholerae на фетуин-агарозе ( а и на ганглиозиддиаминодипропиламино-агарозе ( б. [13]

Аффинная хроматография токсина из Vibrio cholerae, меченого 1251, на агарозе с присоединенным фетуином или на ганглиозид - диаминопропиламиноагарозе [45] показана а рис. 6.15. Агароза с присоединенными ганглиозидами может быть использована также для очистки других токсических белков, таких, как ботулин или столбнячный токсин, который, как известно, также образует прочные комплексы со свободными ганглиозидами. [14]

Количественная аффинная хроматография позволяет изучать взаимодействия иммобилизованных ферментов с их ингибиторами, кофакторами и другими веществами, образующими с ферментами специфические комплексы. [15]

Страницы: 1 2 3 4