Аффинная хроматография

Cтраница 3

Однако термин аффинная хроматография вызывал ( и все еще продолжает вызывать) много возражений. Однако во многих случаях провести четкую границу между биоспецифическим комплексом и комплексом, образующимся в результате действия неспецифических гидрофобных взаимодействий, не так просто, как могло бы показаться на первый взгляд. [31]

Влияние рН на связывание лактатдегидрогеназы мышцы сердца свиньи е-аминогексаноил - МАВ - сефарозой ( а и № - ( 6-аминогексил - АМР - сефарозой. [32]

Примером является аффинная хроматография ацетил-холинэстеразы [16], рассмотренная в разд. [33]

Для развития аффинной хроматографии и иммобилизации ферментов наиболее важны поиск и разработка новых нерастворимых носителей. Исследования в этом направлении необходимы для введения в практику методов, до сих пор применявшихся главным образо. Поскольку до сих пор не создан носитель, который удовлетворял бы полностью всем предъявляемым требованиям, необходимо очень тщательно относиться к вопросам выбора носителя и метода присоединения к нему лиганда, принимая во внимание возможность его практического применения, а также и экономические соображения. [34]

Области применения аффинной хроматографии многочисленны и разнообразны и не ограничиваются только теми, которые перечислены выше. В последующих разделах рассмотрены некоторые примеры, иллюстрирующие возможности аффинной хроматографии. [35]

Особый вариант аффинной хроматографии связан с использованием хелатных сорбентов. На матрице закрепляют хелирующий агент, затем путем пропускания раствора соответствующей соли колонку заряжают ионами Cu2, Zn2, Co 2 и др. На этих ионах при хроматографии задерживаются белки, способные образовывать с ними комплексы. [36]

Успехи метода аффинной хроматографии связаны с созданием биоспецифических сорбентов, способных связывать находящиеся в растворе вещества на основе взаимодействия фермент - субстрат, фермент-ингибитор, антиген-антитело. Подавление сорбционных свойств биоспецифических сорбентов ( инактивация активных центров) часто наблюдается при выделении веществ из экстрактов или культуральных жидкостей без предварительной очистки. В связи с этим основные успехи аффинной хроматографии относятся к препаративным лабораторным процессам выделения белков, в том числе ферментов, после использования предварительных стадий их очистки. Масштабирование этих процессов и многократное использование биоспецифических сорбентов, особенно при работе с многокомпонентными растворами, в связи с изложенными причинами часто встречает определенные затруднения. [37]

Специфичность методов аффинной хроматографии наряду с избирательной сорбцией кетоаминной фракции Hb Ale на ПААГ определяется спектрофотометрической детекцией тема, имеющего максимальную величину оптической плотности при длине волны 415 нм. Это обстоятельство позволяет избежать искажения результатов анализа за счет присутствия других гликолизированных белков эритроцитов или плазмы крови. [38]

Ряд методов аффинной хроматографии, используемых для очистки специфических РНК, основан на химическом взаимодействии ионов ртути ( II) с сульфгидрильными группами. Такие производные в отличие от на-тивной РНК способны при низкой ионной силе прочно связываться с агарозой, содержащей сульфгидрильные группы. [39]

В основе аффинной хроматографии лежит специфическое взаимодействие белков ( или других биологических молекул) с лигандами, иммобилизованными с помощью ковалентных связей на нерастворимом носителе. Например, фермент может взаимодействовать с иммобилизованным субстратом или аналогом субстрата, иммобилизованный лектин взаимодействовать с углеводным остатком гликопротеина или рецепторный белок со своим специфическим лигандом. [40]

Адсорбенты для аффинной хроматографии обычно состоят из трех ковалентно-связанных компонентов, нерастворимого носителя, ножки ( спейсера) и специфического лиганда. [41]

Немаловажным преимуществом аффинной хроматографии является и то обстоятельство, что в пей гидролитические ферменты ( про-теазы, нуклеазы и др.) с самого начала отделяются от своих субстратов. В частности, этим обстоятельством обусловлен высокий выход очищаемых макромолекулярных препаратов, характерный для аффинной хроматографии. [42]

Хотя принцип аффинной хроматографии очень прост и нагляден, из приведенных кратких замечашш легко понять, что конструирование аффинного обменника для очистки ( или фракционирования) нужного вещества является делом достаточно деликатным. [43]

Условия проведения аффинной хроматографии зависят от природы соединения, которое нужно выделить. Однако существует ряд общих требований, касающихся свойств нерастворимого носителя, выбора типа аффинного лиганда, его связывания с носителем, условий адсорбции и элюирования. [44]

Заканчивая рассмотрение аффинной хроматографии белков, необходимо отметить, что вне поля нашего зрения осталась родственная область приготовления и использования иммобилизованных ферментов. Многое из того, что было сказано о способах посадки лигандов на активированные матрицы, имеет к этой области прямое отношение. Однако к кругу физико-химических методов исследования белков и нуклеиновых кислот использование иммобилизованных ферментов имеет лишь косвенное отношение, так что за недостатком места мы на нем остановиться не сможем. [45]

Страницы: 1 2 3 4