Легкая цепь
Cтраница 3
Белки HL-A должны быть олигомерными. Поэтому нет необходимости в ковалентной связи легких цепей с тяжелыми; такая связь должна - быть только между тяжелыми цепями. Диссоциация и реассоциация легких цепей не могут нарушить молекулярной специфичности. Трехмерная структура белков HL-A была предсказана на основании данных по их специфичности и известной структуре иммуноглобулинов. Таким образом, физиологические данные способствуют появлению рабочих гипотез при исследовании структуры белка. [31]
Однако компенсирующим преимуществом является то, что легкая цепь белков HL-A синтезируется специализированными клетками, и, поскольку они распределены, как и гормоны, по всему организму, частичные потери в почках не имеют серьезного значения. По-видимому, целесообразно начать систематические исследования клеток, образующих легкую цепь. Таким путем результаты изучения белковых структур также могут привести к появлению рабочих гипотез в общей физиологии. [32]
Как схематически показано внизу слева, молекула миозина ( 6 в г) состоит из длинной суперспирализоваиной а-спирали, хвоста, и двух глобулярных головок. Хвост образован тяжелыми цепями молекулы, которые вместе с четырьмя легкими цепями участвуют также в образовании обеих головок. Тонкие фнламенты прикрепляются к Z-дискам, отделяющим саркомеры друг от друга. Тонкие фнламенты, выходящие из разных сторон Z-мембраны, имеют противоположную полярность. Миофибриллы ( л), находящиеся на следующем уровне структурной иерархии, построены из саркомеров. [33]
В первом случае сначала собираются тяжелые цепи, а затем к ним присоединяются легкие цепи. Во втором случае сначала собирается блок из одной тяжелой и одной легкой цепи. Затем два подобных блока соединяются. В аппарате Гольджи антитела подвергаются гликозилированию, после чего секретируются из клетки во внеклеточное пространство. [34]
Молекула миозина сильно вытянута в длину, причем ее длинная, стержневая часть образована двумя тяжелыми полипептидными цепями, которые на этом участке имеют структуру а-спирали и к тому же закручены одна вокруг другой в суперспираль. N-концы тяжелых цепей образуют глобулярные головки, каждая из которых находится в комплексе с двумя легкими цепями. АТФазная активность миозина сосредоточена в головках, имеющих каждая по одному активному центру. Да, лишенный большей части стержня, или хвоста, миозино-вой молекулы, а также препараты головок. Электрофоретическая картина зависит от вида примененной протеазы, ее концентрации и времени обработки белка. Головки, или, как их называют, субфрагмент-1, полученный путем химиотрипсинового протеолиза, при ДСН-элект-рофорезе дают полосу 96 000 Да - - фрагмент тяжелой цепи, и две полосы легких цепей - примерно 18 000 и 15 000 Да. Две другие легкие цепи отсутствуют вследствие деградации. Тяжелый меромиозин обычно дает целый набор полос, среди которых присутствуют: 81 000 Да, 74 000, 51 000, 37000, 25000, 21 000 и некоторые другие. Большинство этих полос соответствует различным фрагментам тяжелых цепей. Следует обратить внимание на то, что, несмотря на наличие разрывов в полипептидных цепях, активность тяжелого меромиозина как АТФазы в полной мере сохраняется. [35]
Эксперимент, который прямо показал, что в ходе развития В-клеток ДНК подвергается перестройке. Была экстрагирована ДНК из мышиной опухоли плазматических клеток ( миеломы), синтезирующей специфическую Х - легкую цепь, и из 13-дневного мышиного эмбриона. [36]
Да лолностью деградируют при химотрипсиновом протеолизе. Примерно такая же карта наблюдается и в случае субфрагмента-1, полученного методом папаинового протеолиза, однако подвижность одной из легких цепей может возрасти вследствие ее частичной деградации. [37]
Пара праймеров, которая используется для амплификации левого фрагмента, включает неполностью комплементарный олигонуклеотид, спаривающийся с тяжелой цепью гена-мишени, и обычный, полностью комплементарный праймер, гибридизую-щийся с участком легкой цепи, фланкирующим левый уникальный сайт рестрикции. Один из праймеров, использующихся для амплификации правого фрагмента, содержит некомплементарные нуклеотиды и спаривается с тяжелой цепью гена-мишени, а второй праймер полностью комплементарен участку легкой цепи, фланкирующему второй ( правый) уникальный сайт рестрикции. Продукты ПЦР-амплификации очищают и объединяют, а затем подвергают денатурации и ренату-рации. В результате образуется некоторое количество частично двухцепочечных молекул ДНК, спаренных в области гена-мишени. [38]
Белки HL-A должны быть олигомерными. Поэтому нет необходимости в ковалентной связи легких цепей с тяжелыми; такая связь должна - быть только между тяжелыми цепями. Диссоциация и реассоциация легких цепей не могут нарушить молекулярной специфичности. Трехмерная структура белков HL-A была предсказана на основании данных по их специфичности и известной структуре иммуноглобулинов. Таким образом, физиологические данные способствуют появлению рабочих гипотез при исследовании структуры белка. [39]
Легкая цепь состоит из одного вариабельного ( VL) и одного константного ( CL) доменов. И легкие, и тяжелые цепи содержат по одному вариабельному домену. Что касается константных областей, то в легких цепях локализован один домен, а в тяжелых - три или четыре домена. В основании развилки находится шарнирный участок, способствующий ограниченному пространственному перемещению полипептидных цепей. При обработке папаином молекула Ig гидролизуется в области шарнирного участка, образуя три фрагмента: два антиген-связывающих F ( рис. 30.9) и один, способный к кристаллизации, - Fc. Легкие и тяжелые цепи связаны между собой дисульфидными связями. [40]
 |
Белки, состоящие из Ig-доменов. [41] |
Свертывание цепи показано в виде Стереоизображения С - остова ( разд. Молекула симметрична; каждая половина состоит из тяжелой цепи Н и легкой цепи L. Легкая цепь, которая представляет один домен Ig, называется также Рз-микроглобулнном. Обе тяжелые цепи соединены дисульфндным мостиком, который, по-видимому, находится в присоединяющейся к мембране части молекулы, в - иммуноглобулин G. Молекула симметрична; каждая половина состоит из тяжелой цепи Н и легкой цепи L. Каждая из цепей связана с по меньшей мере одной друюй цепью одним или ббльшим числом дисульфидных мостиков. [42]
В период развития В-клеток в генных пулах к - и Н - цепей любой V-сегмент может объединиться с любым J-сегментом, что увеличивает в четыре раза число V-областей, которые эти пулы могут производить. Кроме того, существуют некоторые различия в точном месте соединения V-J, и это приводит к еще большему разнообразию аминокислотных последовательностей. Существенно то, что сайт соединения V-J кодирует часть третьей гипервариабельной области легкой цепи. [43]
Это придает актиновой сети определенную ригидность, особенно при встраивании в эту сеть белков миозина. Формируется гель, который способен сокращаться под действием миозина в присутствии Mg и АТР. Как упоминалось выше, в запуске этих процессов самое активное участие принимает киназа легкой цепи миозина. [44]
АГ характеризуются различиями первичной структуры. Эти различия локализованы в совершенно определенной области макромолекулы IgG - В вариа - 1.3. Схема доменной структу-бельной, или У-области. Вариабельная область занимает примерно половину Fab фрагментов папаинового протеолиза ( см. рис. 1.2), т.е. в нее входит около половины легкой цепи и половины прилежащего участка тяжелой цепи у их М - концов. [45]
Страницы: 1 2 3 4