Время - хроматографирование
Cтраница 3
Прежде чем наносить пробу на слой сорбента, рекомендуется смочить его смесью растворителей, которые будут использоваться в дальнейшем для разделения компонентов. Эта операция обеспечивает лучшую воспроизводимость и уменьшение размывания пятен во время хроматографирования. [31]
В некоторых случаях, в частности, в опытах, имеющих целью определение оптимального состава растворителя для метода, который затем будет использоваться повседневно, удобна методика градиентной элюции. Состав смеси растворителей, входящих в подвижную фазу, во время хроматографирования непрерывно меняют с предварительно установленной скоростью, что дает возможность на одной хроматограмме разделить сложную смесь веществ, имеющих совершенно разные коэффициенты распределения. [32]
Растворитель: к-бутанол 85 % - ная НСООН ( 3: 2 5 по объему), время хроматографирования - 2 5 - 3 5 час. [33]
Отличительной чертой такого детектирования является то, что исследователь имеет возможность сконцентрировать все свое внимание на интересующем его соединении и игнорировать многие посторонние соединения, выходящие из колонки. Кроме того, разделенные соединения всегда имеются в малых количествах, и если они не обнаруживаются с помощью газохроматографического детектора, то биологическая активность в определенный момент во время хроматографирования подскажет исследователю, что выходит довольно активный феромон. [34]
К распределительной хроматотрафии относится бумажная хроматография ( или хроматография на бумаге) в ее обычных вариантах. В этом методе вместо пластинок с тонким слоем сорбента, употребляемых при ТСХ, применяют специальную хроматографическую бумагу, по которой, пропитывая ее, перемещается жидкая ПФ во время хроматографирования от линии старта до линии финиша растворителя. [35]
В тонкослойной хроматографии адсорбентом служит тонкий, равномерный слой ( обычно толщиной около 0 24 мм) сухого мелкоизмельченного материала, нанесенного на подходящую подложку, например на стеклянную пластинку, алюминиевую фольгу или пластмассовую пленку. Подвижная фаза движется по поверхности пластинки ( обычно под действием капиллярных сил); хроматографический процесс может зав-исеть от адсорбции, распределения или комбинации обоих явлений, что в свою очередь зависит от адсорбента, его обработки и природы используемых растворителей. Во время хроматографирования пластинка находится в хромато-графической камере ( чаще всего изготовленной из стекла, чтобы можно было наблюдать движение подвижной фазы по пластинке), которая обычно насыщена парами растворителя. Для изменения свойств приготовленного слоя его можно пропитать буферными материалами, чтобы получить кислый, нейтральный или основной слой; можно использовать и другие вещества, такие, как нитрат серебра. В некоторых случаях слой может состоять из ионообменной смолы. [36]
Адсорбционная хроматография основана на различии в адсорбционных свойствах компонентов разделяемой смеси. На поверхности твердого адсорбента находятся активные участки, свободное силовое поле которых способно так или иначе фиксировать молекулы посторонних веществ. Во время хроматографирования, осуществляемого смешением адсорбента с исследуемым раствором в колонке или в тонком слое, происходит непрерывный процесс сорбции и десорбции растворенного вещества на поверхности сорбента. Когда число частиц, адсорбирующихся на поверхности в единицу времени, равно числу частиц, покидающих поверхность ( скорость сорбции равна скорости десорбции), наступает состояние адсорбционного равновесия. [37]
Для хроматографирования в камеру, которой служит стеклянная банка с хорошо пришлифованной крышкой, опускают подставку для стержня и наливают в нее такое количество прозрачного ( мутный не допускается) растворителя, чтобы его слой был высотой 3 - 5 см. На стеклянный стержень ( палочку) нанизывают через крестообразные разрезы восемь полосок на расстоянии 3 - 5 см друг от друга и, держа стержень за середину, осторожно вешают его на крючки подставки в банке. При этом концы хроматограмм ( полосок) должны погрузиться в растворитель на 1 - 1 5 см. Банку закрывают. Во время хроматографирования надо следить, чтобы ленты не соприкасались, а их концы до окончания хроматографирования оставались погруженными в растворитель на 1 - 1 5 см. Температура окружающего воздуха должна быть 18 - 25 С. Когда растворитель дойдет по полоске до стержня, банку открывают, стержень с хроматограм-мами вынимают, банку закрывают, а стержень кладут на подставку в вытяжном шкафу и хроматограммы сушат на воздухе до полного удаления запаха растворителя. Если хотят получить отделение не только гексоз от пентоз, но разделить смесь на отдельные сахара, то проводят многократное хроматографиро-вание следующим образом. Высушенные хроматограммы на стержне снова ставят в банку с растворителем, ждут, когда растворитель дойдет до стержня, вынимают и сушат их. [38]
Об этом: влиянии кратко упоминают Копсден с сотрудниками, которые констатировали также, что соотношение между поперечными сечениями неподвижной и подвижной ( например, бутанолыюй) фаз не остается постоянным по всей длине листа. Бурмаи Баперджи 2 ], Рокланди сотрудники [1] и Каукабани и Кассиди, изучавшие этот вопрос независимо друг от друга, пришли к заключению, что при снижонинсодержания воды в растворителе значения Rf гидрофильных веществ понижаются, так как ухудшается их растворимость в подвижной фазе. Во время хроматографирования, если бумага недостаточно насыщена парами воды и если камера герметична и более летучий растворитель не испаряется с бумаги, происходит фронтальный анализ составных частей смеси и запаздывание сорбции води вблизи старта. [39]
Как уже указывалось выше, для наиболее полной идентификации рекомендуется предварительное фракционирование природной смеси жирных числот. Одним из способов отделения насыщенных жирных кислот от ненасыщенных является окисление последних. Это можно выполнять как предварительно, так и во время хроматографирования на бумаге. [40]
Кроме улучшения качества идентификации компонентов, комбинированная система ГХ - ТСХ позволяет получать информацию и об эффективности каждого из составляющих ее методов. Горизонтальная ось пластинки соответствует направлению движения пластинки, а вертикальная - движению отдельных компонентов во время хроматографирования. [41]
В качестве растворителя используют н-бутанол, насыщенный 0 1 % - ным раствором аммиака. Расстояние между точками - от 1 до 1 5 см. Диаметр наносимых пятен не должен превышать 2 мм. Во время хроматографирования камеру нужно закрыть черной бумагой. [42]
Если на одной полоске бумаги необходимо получить несколько хроматограмм, то расстояния между точками нанесения растворов на карандашной линии должны быть не менее 3 см. Вносят бумагу в камеру, закрывают крышку и оставляют на 90 мин. Погружают бумагу в подвижную фазу, указанную в статье, и хроматографиру-ют до указанного расстояния или в течение определенного времени. Вынимают бумагу из хроматографической камеры и высушивают на воздухе. Во время хроматографирования и высушивания бумагу следует защищать от яркого света. [43]
 |
Расположение волокон целлюлозы в листе бумаги. [44] |
При выборе сорта хроматографической бумаги для разделения углеводов, аминокислот и других веществ руководствуются результатами ее испытания, которое проводят на чистых растворах смесей интересующих веществ, применяя соответствующие растворители. Скорость разделения смесей веществ зависит не только от сорта хроматографической бумаги, но также и от направления в ней волокон целлюлозы. Полоска хроматографической бумаги во время анализа играет роль колонки из набухших волокон целлюлозы. Между волокнами во время хроматографирования движется растворитель с анализируемой смесью веществ. Волокна целлюлозы в листе бумаги расположены в определенном порядке, поэтому в полоске бумаги их расположение зависит от того, как она вырезана. Площадь, занимаемая веществом, выделенным во время хроматографирования, будет больше, если разделение проводят на полоске с продольным расположением волокон. Это влияние структуры бумаги необходимо учитывать при хроматографических анализах и особенно при количественном определении компонентов. [45]
Страницы: 1 2 3 4