Выделение - белок
Cтраница 4
 |
Влияние рН раствора на сорбцию инсулина гелевым сульфокатионитом СДВ-Т ( 1 и макропористым сульфокатионитом КУ-23 ( 2.| Влияние рН раствора на сорбцию лизоцпма макропористым суль. [46] |
Гидролитическое действие на пептидные связи белков ограничивает их использование в области сорбции и выделения белков. [47]
Обычные методы органической химии, применяемые для изолирования органических соединений, непригодны для выделения белков ввиду того, что большинство белков необычайно чувствительно к нагреванию, к действию кислот, оснований, органических растворителей и в некоторых случаях даже к действию дестиллированной воды. Нерастворимые клеточные белки можно легко получить после экстрагирования из клеток жиров, углеводов и растворимых белков водой и органическими растворителями. Часто экстрагирование проводят также разведенными растворами NaCl или бикарбоната натрия, так как некоторые белки растворимы только в присутствии нейтральных солей. [48]
В настоящей статье изложены сведения, которые могут представлять интерес для исследователя, занимающегося выделением белков из природных соединений для самых различных целей. [49]
Ввиду того что многие белки в растворе могут денатурироваться даже при комнатной температуре, всю процедуру выделения белка, во избежание его денатурации, нужно вести при низких температурах. Особенно неустойчивы растворы белков в дестиллированной воде. [50]
Предварительная обработка тканей или их составных частей приводит к удалению или разрушению посторонних мешающих компонентов, что облегчает выделение белка. Мортон [54] сообщил, что после предварительной обработки - бутиловым спиртом можно экстрагировать водными растворителями ряд ферментов, которые до сих пор считались связанными с нерастворимыми частицами, например такими, как митохондрии. Метод, повиди-мому, основан на удалении фосфолипидов. Результаты обработки отмытых мышечных остатков этиловым спиртом и эфиром перед выделением тропомиозина [55] или ацетоном, хлороформом и бутиловым спиртом перед выделением актина [56, 57] объясняют частичным отделением липидов, а также денатурацией других белков. [51]
Поскольку незначительные вариации в строении белковой молекулы ведут к изменению ее свойств, важно избегать таких изменений или контролировать их в процессе выделения белка. Такие модификации могут происходить а) благодаря химическим реакциям, в ходе которых разрушаются некоторые ковалентные связи в молекуле, б) вследствие изменения водородных и соле-выхчсвязей, обусловливающих трехмерную структуру молекулы, в) в результате изменения характера соединения с другими белковыми или небелковыми веществами, связанными с данным белком. Как было уже указано выше, изменения последнего типа необязательно должны сопровождаться изменениями самой белковой молекулы. Для процессов выделения белка такие изменения могут и не иметь особого значения, хотя они в конечном счете должны быть приняты во внимание, особенно при исследовании клеточных структур. При выделении неизмененных нативных белков следует избегать причин, обусловливающих изменения и относящихся к первым двум типам. Однако если нет специальных указаний, то лучше пользоваться, там где это возможно, только такими методами, о которых известно, что они обусловливают наименьшие изменения в структуре молекулы. [52]
Реакции осаждения белков солями тяжелых металлов идут обычно полно ( особенно в присутствии солей щелочных металлов) и ими пользуются не только для выделения белков из растворов, но и для освобождения жидкостей от белков. [53]
Поскольку стабильность различных белков даже в одной и той же смеси может значительно изменяться, является очевидным, что в каждом отдельном случае выделения белка следует учитывать его индивидуальные особенности и принимать необходимые меры предосторожности. [54]
Страницы: 1 2 3 4