Гель - агароза
Cтраница 3
Вильямсон и Аллисон [13] сделали попытку усовершенствовать стадию иммунопреципитации с помощью метода Лорелла [63], заключающегося в проведении электрофореза антигена в гелях агарозы, включающих антитела. Согласно предложенной методике, белки после разделения переносят на полоску фильтровальной бумаги, которую затем помещают на слой агарозы с антителами, и проводят электрофорез. В другом варианте удаляют лишний сефадекс по Хансону [14], а затем осторожно переносят весь гель агарозы с антителами на полоску сефадекса. [31]
После того как выделенная из обычной кукурузы митохондриаль-ная ДНК была обработана рестриктирующей эндонуклеазой, а затем продукты гидролиза были подвергнуты электрофорезу в геле агарозы, на электрофореграмме было обнаружено около 50 полос. В электрофореграммах, полученных при аналогичном исследовании ДНК кукурузы с признаком мужской стерильности ( разд. [32]
Поэтому методы гель-фильтрации и ионообменной хроматографии не получили широкого распространения при фракционировании нуклеиновых кислот и значительно уступают ультрацентрифугированию и электро-форетическому разделению в геле агарозы, полиакриламидиом геле или их смеси. Поскольку величина отрицательного заряда нуклеиновых кислот и продуктов их расщепления мало зависит от рН, а отношение заряда к молекулярной массе сохраняется практически неизменным, разделение нуклеиновых кислот при электрофорезе определяется не их зарядом, а размером молекул. При наличии маркеров с известной молекулярной массой возможно определение молекулярной массы препаратов нуклеиновых кислот и их фрагментов. [33]
В табл. 8.4 приведены количества аффинного лиганда, связанного с 2, 4 и 6 % - ной агарозой, а также рассчитанные значения ожидаемой плотности гидроксильных групп в различных гелях агарозы. [35]
При полном расщеплении ДНК фага К рестриктазой Hind III образуются фрагменты, содержащие 23130, 9416, 6557, 4361, 2322, 2027, 564 и 165 пар оснований; они могут быть разделены с помощью электрофореза в геле агарозы. [36]
Из рис. 5.3, б видно, что количество связанного трипсина, определенное экспериментально в ходе исследования равновесного связывания, зависит от концентрации исходного раствора трипсина ( в 0 05 М бицине, рН 8 15, и 0 25 М хлориде калия, 4 ч, 4 С), а также что только аффинный сорбент, приготовленный из 4 % - ного геля агарозы, содержащего 19 2 мкэкв. [37]
Батгейт [21] указывал на недостаток биогеля Р-300, состоящий в том, что при использовании дозирующего насоса происходит значительное уплотнение этого геля. Гель агарозы ( биогель А, 0 5 М, 200 - 400 меш) не уплотняется до такой степени, и, несмотря на то что агароза является углеводом, она оказалась наиболее подходящей для автоматической системы определения молекулярных масс. Колонка 30X0 9 см, предварительно обработанная дихлордиметилсиланом, была наполнена биогелем А ( 0 5 М, 200 - 400 меш) согласно заводской инструкции. Перед использованием колонку в течение нескольких дней промывали раствором хлорида ртути ( II) для того, чтобы вытеснить азид натрия, являющийся антикоагулянтом геля агарозы, поскольку азид сильно мешает использованию орсина для детектирования. Хлорид ртути ( II) выполняет двойную роль: антикоагулянта и подвижной фазы. [38]
На стеклянную пластинку обычным способом наносят 1 % - ный гель агарозы, содержащий 2 5 % - ную иммунную сыворотку анти - IgQ. В затвердевшем геле агарозы вырезают нужное число круглых лунок для исследуемой сыворотки и IgG и заливают в них по несколько капель агарозного раствора. Препараты IgG известной концентрации в соответствующем разведении вносят в несколько лунок; в остальные лунки заливают образцы исследуемых сывороток и проводят электрофорез, как описано выше. [39]
К одному объему геля агарозы, несущей иммобилизованный тетрамер ЛДГ, добавляют два объема 1 5 М мочевины. Отсутствие в пробе мочевины контролируют с помощью реактива Несслера. В полученной суспензии определяют содержание белка, как указано выше. Измеряют удельную активность иммобилизованного мономера, определяют величины удельной активности, Km и Vmax для субстратов реакции. Сравнивают полученные величины с соответствующими значениями, полученными для иммобилизованного тетрамера ЛДГ и натив-ного фермента. [40]
Ножка привязана к гелю агарозы эфирной связью. Ножка привязана к гелю агарозы бромциановым методом. [41]
Следует отметить, что область применения гелей агарозы лишь частично перекрывается с областью использования гелей декстрана и полиакриламида. Как уже указывалось, гели агарозы, исключая сагавак, выпускаются в виде сферических гранул, поэтому при фракционировании на них должны получаться более узкие зоны, чем при применении сагавака. [42]
Устойчив в органических растворителях, но во многих из них не набухает, что ограничивает его применение в этих растворителях. Биогсль А - носитель сферической формы на основе геля агарозы. Сефароза ( Рагтас1а Рте Спегшса1к) - носитель на основе геля агарозы с небольшим числом заряженных групп, устойчив при рН9 - 14, чувствителен к замораживанию и нагреванию выше 40 С. Зачастую носители на основе гелей агарозы поставляются в набухшем состоянии. [43]
 |
Иммуно-гель-фильтрация сыворотки человека при патологии с применением иммунодиффузии на ацетилцеллюлозной мембране против. [44] |
В этом случае после гель-фильтрации проводят иммунодиффузию в геле агарозы, содержащем антитела. Существенным моментом в этой методике является создание надежного контакта геля агарозы с гелем сефадекса при сохранении полученной картины разделения. Это удается осуществить, осторожно помещая 1 5 % - ный гель агарозы размером 10 - 10 см на слой сефадекса. [45]
Страницы: 1 2 3 4