Cтраница 2
Если электроэндоосмос в агаровом геле при электрофорезе является серьезной помехой иммуноэлектрофоретического анализа, рекомендуется заменить агаровый гель гелем агарозы. [16]
Часть лунок в агаровом геле заполняют капиллярной пипеткой заранее приготовленными растворами белка известной концентрации в соответствующих разведениях. В оставшиеся лунки наливают исследуемые образцы белковых смесей, например сыворотки крови. Следует тщательно следить за тем, чтобы во всех лунках был налит одинаковый объем растворов, заполняющий их точно до краев. После этого агаровую пластинку помещают во влажную камеру и на 24 ч оставляют в холодильнике. [17]
Подобно крахмальному и акриламидному агаровый гель является очень мягким носителем: в отличие от электрофореза на бумаге при нем не происходит инактивации белков, что позволяет определять активность отдельных фракций белков епосредственно в геле после проведения электрофореза. [18]
Миграция белков в слое агарового геля подобна их движению при свободном электрофорезе. Однако в агаровом геле значительно сильнее, чем при электрофорезе на бумаге, выражен электроосмос, который усиливает поток буферного раствора в сторону катода. Чтобы устранить возможные артефакты, следует размещать лунки для внесения исследуемого образца точно в центре агаровой пластинки. [19]
Гибридизация ДНК-ДНК с использование агарового геля сводится к следующему. За несколько минут до начала опыта его расплавляют на кипящей водяной бане и получают 8 % - ный агар. Одновременно денатурируют препарат нативной ДНК. С этой целью 5 мг ДНК в 5 мл 0 1 X SSC кипятят 10 минут при 100 и быстро охлаждают в ледяной бане. [20]
Растворимый антиген диффундирует в агаровом геле, содержащем иммунную сыворотку. В том участке геля, где возникает его относительный избыток, в агаре образуется полоса преципитации. [21]
Вследствие наличия электроосмоса в агаровом геле некоторые белковые компоненты сыворотки крови ( у-глобулины) могут перемещаться при электрофорезе в направлении, не соответствующем их заряду. [22]
Обычно иммуноэлектрофорез проводят в слое агарового геля на стеклянных пластинках размером 180 х 130 мм, которые следует перед опытом тщательно вымыть, обезжирить, высушить и расположить строго горизонтально; любое отклонение пластинки от горизонтального уровня приводит к неравномерности толщины агарового геля. Рекомендуется применять следующий прием: стеклянную кювету соответствующего размера заполняют 5 % - ным расплавленным агаром; после его затвердения образуется горизонтальная поверхность, на которую и помещают стеклянную пластинку. Для того чтобы положение пластинки всегда было строго горизонтальным, после затвердения агара кювету не следует сдвигать с места. [23]
Так, при электрофорезе в агаровом геле интенсивность эндосмоса преобладает над электрофорезом и частицы многих крупных белков ( Р2 - и Y - глобул и нов), несмотря на то, что они имеют отрицательный заряд, движутся к катоду. [24]
Обычно реакцию ставят в плоском слое агарового геля, затвердевшего на дне чашки Петри. Сначала внутреннюю поверхность чашки Петри покрывают агаровой пленкой. Для этого ее наполняют 0 1 % - ным расплавленным агаром, затем сразу же агар выливают, а чашки переносят в эксикатор для полного высушивания. Другой вариант подобной процедуры состоит в том, что покрывают дно чашки Петри слоем 1 % - ного расплавленного агара толщиной примерно 1 мм. В качестве консерванта в агар следует добавить мертиолат. [25]
Стекла, на которые наносят слой агарового геля, должны быть тщательно вымыты и обезжирены. Их следует мыть серной кислотой, содержащей бихромат калия, затем отмыть от кислоты проточной водопроводной и дистиллированной водой и хранить в этаноле. Перед использованием предметные стекла вытирают насухо, следя за тем, чтобы на поверхности не осталось никаких соринок. [26]
В результате диффузии антигена в пластинке агарового геля, содержащего иммунную сыворотку, образуется преципитат. Наибольшее разведение антигена, при котором еще происходит преципитация, является его титром. [27]
Осторожно надавливая, их вертикально погружают в агаровый гель в нужном месте, стараясь не повредить соседние участки геля. Вырезав контуры лунок, штампы или стеклянные трубки извлекают, а вырезанные столбики агара удаляют, отсасывая их при слабом вакууме иглой большого диаметра. [28]
Ацетат-целлюлозные мембраны лишены ряда недостатков, присущих агаровому гелю. [29]
Штампы для вырезания наблюдается реакция преципи-лунок в агаровом геле. [30]