Крахмальный гель

Cтраница 3

Хроматография фосфоглюкоизомеразы ( мышиной на колонке. [31]

S, F, iFS - три формы фермента, свойственные трем фенотипам и различающиеся по электрофорезу в крахмальном геле. [32]

При электрофорезе в поддерживающих средах наблюдается и электроосмос, влияющий на разделение белковых фракций, особенно если электрофорез проводить не на бумаге, а в агаровом или крахмальном геле. [33]

ДНК-нуклеотидилтранс-фераза, или фермент Корнберга ( ДНК-полимераза I), осуществляющий полимеризацию дезоксирибонуклеозидтрифосфатов на ДНК-матрице в присутствий ионов Mg2 - Выделенный из кишечной палочки после тщательной очистки фермент представляет собой препарат, гомогенный по критериям седиментации, хроматографии и электрофореза в крахмальном геле. Наряду с полимеразной активностью фермент обладает также экзонуклеазной активностью. [34]

Недостатки способа: 1) разваренная масса недостаточно разжижена и имеет большую вязкость, что приводит иногда к застоям массы между стенкой чана и змеевиками, вследствие чего она застывает в большие комки; 2) масса довольно медленно расхолаживается от 100 до 60, что приводит к образованию малоподвижного, устойчивого крахмального геля, который медленно осахаривается амилазой; 3) кратковременное воздействие амилазы на разваренную массу; 4) 5 % амилазы неизбежно инактивируется. [35]

Перед приготовлением крахмального геля 60 мл основного раствора разводят дистиллированной водой до 100Э мл. [36]

Из фильтрованной бумаги соответствующего размера делают фитили и, смочив их буферным раствором, накладывают на оба конца крахмального блока так, чтобы они обеспечили контакт в электрической цепи с буферными растворами в резервуарах аппарата. Ванну с крахмальным гелем закрывают крышкой, которую закрепляют винтами. [37]

С помощью электрофореза на крахмальном геле [84], на бумаге [85] или микроиммуноэлектрофореза [86] удается выделить две и более компонент, обладающих оксидазной активностью. [38]

Периодические осадки в гелях. a - Mg ( OH2. б - Ag2Cr2O. i в - то же, 8 чашке Петри. [39]

Электрофорез в агаровом или крахмальном геле имеет определенные преимущества по сравнению с электрофорезом на бумаге, так как при этом выявляется большее количество и более четкое разделение белковых фракций как в нормальных, так и в патологических сыворотках крови. [40]

На расстоянии 7 см от катодного конца крахмального блока отмечают место внесения образца и в парафиновой пленке прорезают окошко размером 10 х 3 мм. Затем удаляют лежащий под парафином слой крахмального геля так, чтобы получился желобок, в который и вносится исследуемый материал. Очень удобно можно сделать этот желобок с помощью приспособления, изображенного на фиг. Оно представляет собой стальную рамку с острыми краями), которую, надавливая, погружают в крахмальный гель; попадающий при этом в ее внутреннюю полость кусочек геля удаляют. [41]

Этим методом были изучены многие белковые смеси, прежде всего сыворотка крови и гемоглобины. Как уже говорилось, в сыворотке крови крахмальный гель позволяет обнаружить до 30 компонентов; это количество столь велико, что до сих пор не установлено, какую сыворотку считать нормальной, так как у каждого животного и человека имеются индивидуальные, генетически детерминированные отличия. При сравнении с данными электрофореза на бумаге следует помнить, что порядок расположения компонентов в геле может быть совершенно иным. Кроме того, электрофоре-грамма в геле, вообще говоря, неаддитивна благодаря влиянию одних компонентов на подвижность других, так как присутствие белков в высокой концентрации в узких зонах приводит к локальным изменениям проводимости, рН и вязкости среды; иногда наблюдается и прямое взаимодействие белков. Для сопоставления с результатами электрофореза сыворотки крови на бумаге применяют так называемый двухмерный электрофорез. В этом случае сыворотку сначала разделяют на бумаге. После этого зоны не фиксируют, а влажную бумагу прижимают к поверхности крахмального геля и проводят дополнительный электрофорез в геле в перпендикулярном направлении. Лишь после этого зоны проявляют. Этот метод позволяет еще более улучшить разделение. [42]

Некоторые методические сложности препятствуют широкому распространению электрофореза в крахмальном геле, несмотря на его весьма большую разрешающую способность. По сравнению с электрофорезом на бумаге электрофорез в крахмальном геле включает дополнительные операции, связанные с приготовлением и гидролизом крахмала, сборкой прибора, окрашиванием и количественным определением полученных фракций. Однако присущий крахмальному гелю эффект молекулярного сита увеличивает разрешающую способность данного метода по сравнению с электрофорезом на бумаге, и поэтому его используют для более тонкого анализа. [43]

Несмотря на то что полиакриламид стал применяться в качестве носителя для электрофореза лишь после 1960 г., этот материал в настоящее время наиболее широко используется при разделении смесей макромолекул кислого или основного характера. Сейчас полиакрил-амидный гель как носитель практически вытеснил бумагу и крахмальный гель, поскольку в случае белков и нуклеиновых кислот он дает очень хорошее разрешение. Гель получают полимеризацией акриламида в присутствии метиленбисакриламида или других соединений, служащих сшивающими агентами. В работе Сар-джента [3] подробно описаны способ получения гелей, процедура нанесения пробы и условия разделения. [44]

Фракции белка, разделившиеся в крахмальном геле, можно идентифицировать в реакции преципитации со специфической антисывороткой. Для этого Шерлен и Голь [25] предложили комбинировать электрофорез в крахмальном геле с иммунодиффузией в агаровом геле. [45]

Страницы: 1 2 3 4