Гель-фильтрация

Cтраница 3

Для гель-фильтрации при высоком давлении используются уже готовые фирменные колонки. Их подготовка ограничивается заменой элюента, если это необходимо. Колонки низкого давления, как правило, заполняются в лаборатории. [31]

При гель-фильтрации белков необходимо принимать меры для предотвращения их адсорбции на сорбенте и не допускать их денатурации. [32]

Метод гель-фильтрации в тонком слое ( ТСГФ) имеет ряд преимуществ перед колоночной хроматографией. Во-первых, на стартовую линию пластинки шириной, например, 20 см можно нанести 10 - 15 препаратов в виде пятен диаметром 3 - 5 мм, что позволяет сопоставлять результаты фракционирования многих препаратов в одном опыте, в идентичных условиях. Во-вторых, благодаря малой толщине слоя геля ( 0 4 - 1 мм) объем препарата может быть уменьшен до 5 - 20 мкл. Нет проблем и с обеспечением ровного слоя препарата - он мигрирует в виде пятна, как обычно при ТСХ. Наконец, нет необходимости ожидать, пока все компоненты фракционируемой смеси один за другим достигнут конца пластинки. Процесс разделения прекращают, как только наиболее быстрый компонент приблизится к нижнему краю геля. [33]

Метод гель-фильтрации может быть полезной заменой измерению вязкости. Для гидродинамических свойств, упомянутых ранее, объем элюирования линейного полимера в конфигурации статистического клубка является функцией длины его цепи, а следовательно, может служить мерой молекулярного веса. Если ограниченные количества материала не позволяют провести измерение вязкости, то метод гель-фильтрации может стать вполне равнозначной заменой, Если молекулярные веса, оцениваемые методом гель-фильтрации, гораздо ниже получаемых по методу седиментационного равновесия, то следует предположить, что поперечные сшивки ( например, дисульфидные связи) по-прежнему сохраняются. [34]

Методом гель-фильтрации произведено разделение натрийфосфат-ного стекла на фракции, состоящие из пиро -, триполифосфата, фракции с преимущественным содержанием тетраполи-ипептаполифосфата, а также фракцию высокомолекулярных фосфатов. [35]

Результаты гель-фильтрации полученного препарата приведены на рис. 36.6, а. [36]

Обычно гель-фильтрацию продолжают до тех пор, пока не элюируются все белки из колонки, поэтому после опыта колонку можно не отмывать. Однако все же рекомендуется перед каждым фракционированием пропустить через колонку несколько объемов буферного раствора. [37]

Принцип гель-фильтрации ( кружки - гранулы пористой матрицы. черные точки разных размеров - компоненты смеси веществ. [38]

Привычное название гель-фильтрация для хроматографическо-го метода фракционирования молекул по их размерам можно сохранить и в случае хроматографии при высоком давлении, где среди используемых жестких пористых матриц главную роль играет силика-гель. Иногда используют и такие названия, как молекулярно-сито-вая ( molecular sieve) или эксклюзивная ( exclusion... [39]

Поэтому методы гель-фильтрации и ионообменной хроматографии не получили широкого распространения при фракционировании нуклеиновых кислот и значительно уступают ультрацентрифугированию и электро-форетическому разделению в геле агарозы, полиакриламидиом геле или их смеси. Поскольку величина отрицательного заряда нуклеиновых кислот и продуктов их расщепления мало зависит от рН, а отношение заряда к молекулярной массе сохраняется практически неизменным, разделение нуклеиновых кислот при электрофорезе определяется не их зарядом, а размером молекул. При наличии маркеров с известной молекулярной массой возможно определение молекулярной массы препаратов нуклеиновых кислот и их фрагментов. [40]

Тонкослойный вариант гель-фильтрации был предложен Детер-маном [6], а также Иоханссоном и Римо [11 ] и оказался весьма полезным для микроанализа и быстрого сравнительного анализа нескольких образцов исследуемого материала. Эндрюс [1 ], а позднее Моррис [12] применили тонкослойную гель-фильтрацию для определения молекулярного веса белков на основе установленной ими линейной зависимости между логарифмом молекулярного веса данного белка и расстоянием, пройденным им в слое данного носителя за определенный помежуток времени. В соответствии с этим можно ориентировочно определять молекулярные веса неизвестных белков, если одновременно проводить гель-фильтрацию стандартных белков известного молекулярного веса. Когда исследователь располагает достаточно чувствительными методами обнаружения белка в слое носителя, для определения молекулярного веса достаточно всего лишь нескольких микрограмм исследуемого материала. При определении молекулярного веса белков гель-фильтрацией в тонком слое следует иметь в виду, что подвижность данного 5елка при хроматографии в гель зависит не только от молекулярного веса, но и от формы его молекул. Поэтому определение молекулярного веса с помощью гель-хроматографии правомерно - лишь в том случае, когда форма молекул исследуемого белка незначительно отличается от формы молекул стандартных белков, используемых для калибровки. [41]

Оптимальным условием гель-фильтрации является применение геля в форме сферических гранул с диаметром 50 - 100 ц, не разрушающихся под давлением жидкости в 10 - 15 атмосфер. Для получения таких гранул водный раствор реагирующих веществ необходимо диспергировать в гидрофобной среде. [42]

Использование метода гель-фильтрации для фракционирования полисахаридов находится в начальной стадии. Благодаря простоте и быстроте выполнения этот метод может стать ценным дополнением к обычным приемам фракционирования. Теоретически гель-фильтрация может применяться для разделения всех растворимых в воде полимеров. [43]

Как и при гель-фильтрации, размер пор определяет величину молекул, которые могут диффундировать в гранулы сефадекса. Очень большие молекулы не могут проникнуть внутрь гранул сефадекса и адсорбируются на их поверхности. [44]

В нашей лаборатории гель-фильтрация в тонком слое сефадекса G-150 используется для анализа фрагментов молекул иммуноглобулинов, полученных при ферментативном гидролизе. [45]

Страницы: 1 2 3 4