Cтраница 4
В экспериментах по гель-фильтрации гель, например набухший се-фадекс, находится в колонке, через которую потоком растворителя элюируют образец / Молекулы, имеющие больший размер, чем самые большие поры набухшего полимера, не могут проникать внутрь частиц геля и, следовательно, проходят через колонку с раствором, заполняющим пустоты между зернами. Такие молекулы вымываются из колонки в первую очередь. Меньшие по размеру молекулы проникают в частицы геля в различной степени, в зависимости от их размера и формы. Эти молекулы вымываются из колонки отдельными фракциями, последовательность которых соответствует уменьшению размера молекул. [46]
Выбор полимера для гель-фильтрации определяется природой используемого растворителя, размерами молекул и химическими свойствами разделяемых веществ. [47]
При исследовании белков гель-фильтрация пользуется особым вниманием как простой аналитический метод решения ряда задач, например определения молекулярно-весового распределения в биологических жидкостях, сопоставления размеров белковых молекул, определения молекулярного веса на уровне нескольких микрограммов. Несомненным достоинством метода является возможность одновременного сравнения 30 образцов. [48]
Неподвижная фаза при гель-фильтрации представлена жидкостью, находящейся внутри пористых, хорошо смачиваемых гранул, заполняющих хроматографическую колонку. В то же время наиболее мелкие молекулы, размеры которых заведомо меньше диаметра пор в гранулах, будут равномерно распределяться между подвижной и неподвижной фазами. Для них будет осуществляться хроматографиче-ский процесс с присущим ему замедлением миграции хроматографиче-ской зоны; значение К при этом близко к единице. [49]
Принцип гель-хроматографирования ( гель-фильтрации), описанный Олтгелтом и Муром [20], заключается в следующем. Колонка заполняется студнеобразными частицами набухшего в растворителе сшитого полимера, содержащего поры с определенным набором по размерам. Образец полимера, подлежащий фракционированию по молекулярному весу, заливают в виде раствора в колонку и элюируют тем же растворителем. В зависимости от размеров макромолекулы проникают в соответствующие поры студня. Очень крупные молекулы остаются в промежутках между частицами студня и извлекаются с первыми порциями растворителя. Чем меньше размер молекул, тем при большем объеме элюирующей жидкости они будут извлечены из пор студня. [50]
Большинство работ по гель-фильтрации было проведено при использовании мягких наполнителей, таких, как гель декстрана - сефадекс. Эти мягкие гели не пригодны для высокоэффективной жидкостной хроматографии, так как слой наполнителя быстро оседает при давлениях порядка 0 6 - 0 8 ат. [51]
Разделяющая способность при гель-фильтрации возрастает с уменьшением скорости вытекания. Однако до некоторых пределов эта скорость не имеет большого значения. На описанной выше колонке с сефадексом G-25 увеличение скорости вытекания до 120 мл / час не влияет существенно на разделение. G-25 мельче 200 меш, обычно не ограничивают. [52]
Пористые материалы для гель-фильтрации чаще всего выпускаются в виде сферических гранул целого набора диаметров с различными средними размерами пор. Выбор этих размеров обоснован в гл. [53]