Частичный кислотный гидролиз
Cтраница 1
Частичный кислотный гидролиз в данном случае также не пригоден. После ферментативного гидролиза проводят препаративный электрофорез, затем вырезают полоску для аналитического диагонального электрофореза и помещают ее в вакуумный эксикатор. Если анализируется малеини-рованный белок, то в эксикаторе находится буферный раствор, состоящий из 1 % - ного пиридина и 5 % - ной уксусной кислоты; в эксикаторе создается вакуум и его помещают на 16 ч в термостат при 60 С. После инкубации полоски высушивают, пришивают к новым листам фильтровальной бумаги и подвергают электрофорезу в направлении, перпендикулярном первоначальному. [1]
Частичный кислотный гидролиз, проводимый обычно разбавленными минеральными кислотами на холоду или при нагревании, приводит к разрыву гликозидных связей и отщеплению углеводных фрагментов; пептидные цепи в этих условиях, как правило, устойчивы. Этим путем трудно получить мелкие гликопептиды, содержащие узловую гликопептидную связь, однако метод имеет важное значение для получения олигосахарид-ных фрагментов гликопротеинов. [2]
Частичный кислотный гидролиз основан на неизбирательном разрыве полисахаридной цепи. Хотя в принципе таким путем можно получить сведения о всех гликозидных связях полимерной молекулы, технические трудности, связанные с выделением и установлением строения многочисленных фрагментов, заставляют подыскивать строго избирательные методы разрыва полисахаридной цепи, позволяющие значительно увеличить выходы определенных олигосахаридов и одновременно составить представление о типе расщепленных гликозидных связей. [3]
Результаты частичного кислотного гидролиза, периодатного окисления и метилирования указывают на преобладание в глюкане р - 1 3-связей 80 - 90 %) и присутствие небольшого количества р - 1 6-связей. [4]
Посредством частичного кислотного гидролиза и ацетолиза из него выделены два дисахарида ( один из них оказался лактозой), трисахарид и тетрасаха-рид. Строение этих олигосахаридов выяснено путем частичного кислотного и ферментативного гидролиза и периодатного окисления; в частности. [5]
Универсальным методом расщепления является частичный кислотный гидролиз, однако в общем случае он дает сложные смеси олигосахаридов с небольшими выходами. [6]
Для повышения жесткости проводят частичный кислотный гидролиз целлюлозы, разрушающий аморфные участки матрицы. Па их место для сохранения пористости между кристаллическими участками вводят химические сшивки ( рис. 16); одновременно увеличивается степень кристалличности, а поры становятся просторнее. Такую целлюлозу выпускают многие фирмы под названием микрогранулированпая целлюлоза. Помимо повышенной жесткости, она более гомогенна, что обеспечивает более высокую по сравнению с обычной ( волокнистой) целлюлозой разрешающую способность. Микрогранулированная целлюлоза представляет собой уже не длинные нити, а гранулы продолговатой формы с соотношением линейных размеров порядка 5: 1 и диаметром эквивалентной сферы ( см. гл. Микрогранулированная целлюлоза хорошо упаковывается в колонку, но отличается большим сопротивлением току элюента ( хуже течет), чем волокнистая целлюлоза. [8]
Для повышения выхода олигосахаридов при частичном кислотном гидролизе предложено несколько специальных приемов, назначение которых - защитить образовавшиеся низкомолекулярные фрагменты от последующего расщепления. К ним относится гидролиз с одновременным диализом88 87, при котором отщепившиеся олигосахариды удаляются из зоны реакции; в качестве гидролизующего агента используется растворимая в воде, но не способная диализоваться полистиролсульфокислота. [9]
Результаты метилирования, периодатного окисления, частичного кислотного гидролиза и ферментативного гидролиза под действием а-амилазы и - амилазы указывают на высокоразветвленную структуру гликогена со средней длиной цепи 11 - 13 остатков глюкозы; внешние цепи содержат в среднем восемь остатков глюкозы. Близкие по строению полисахариды выделены из микроорганизмов самых различных классов. [10]
Для препаративного получения хитооли-госахаридов разработаны условия частичного кислотного гидролиза, сольволиза жидким НР и ферментативного расщепления. При продолжит, нагревании с сильными минер, к-тами образуется 0-глюкозамин. При натр, с сильными щелочами происходит М - деацетилирование с образованием хитозана; практически получаемые образцы хитозанов обычно имеют мол. КРи могут различаться остаточным содержанием ацетильных групп. [11]
Хлопковая и древесная целлюлозы были подвергнуты частичному кислотному гидролизу. Какая из целлюлоз более доступна для действия гидролизующих агентов, если медное число первой до кипячения в 5 % - м растворе серной кислоты было равно 0 3, а после кипячения - 2 4; второй - 0 6 и 3 7 соответственно. [12]
Два образца сульфатной целлюлозы были подвергнуты частичному кислотному гидролизу. Какая из целлюлоз более доступна действию гидролизующего агента, если медные числа до и после кипячения образцов в 5 % - м растворе серной кислоты в течение 2 ч оказались равными для первого - 0 5 и 3 4, для второго - 0 65 и 2 7 соответственно. [13]
Нами исследовалась также активность глюкана, подвергнутого частичному кислотному гидролизу. Глюкан подвергали гидролизу 5 % НС1 в течение 3 час. В осадке оставалось около 25 % препарата, который нами условно будет называться гидролизован-ным глюканом. [14]
Сэнджер существенно облегчил себе задачу тем, что использовал частичный кислотный гидролиз для расщепления двух цепей, ин - сулина на достаточно малые фрагменты, которые уже можно было охарактеризовать с помощью имеющейся техники. Несмотря на то, что эти две цепи содержат лишь 21 и 30 остатков аминокислот соответственно, в результате гидролиза образовалось много фрагментов и объем экспериментальной работы, включая их разделение, идентификацию и определение последовательности, занял у Сэнд-жера несколько лет; за эту работу ему была присуждена Нобелевская премия. С помощью современной техники эту же работу можно осуществить, самое большое, за несколько недель. Современная стратегия состоит в расщеплении белков на небольшое число относительно крупных фрагментов, что можно осуществить либо химически ( см. раздел 23.3.5), либо ферментативно ( см. разд. Использование более одного метода расщепления обычно приводит к различным фрагментам, последовательности которых перекрываются. [15]
Страницы: 1 2 3 4