Cтраница 3
Принцип его заключается в том, что к гидролизату белка добавляют меченый препарат какой-либо аминокислоты; последнюю выделяют, и рассчитывают концентрацию ее в гидро-лизате по степени разбавления изотопной метки в выделенной аминокислоте. [31]
В качестве исходных веществ для ресинтеза белков были взяты различные гидролизаты белков, расщепленные протеолити-ческими ферментами на низкомолекулярные пептиды, состоящие лишь из 6 - 10 звеньев а-аминокислот ( с мол. [32]
В качестве исходных веществ для ресинтеза белков были взяты различные гидролизаты белков, расщепленные протеолити-ческими ферментами на низкомолекулярные пептиды, состоящие лишьизб-10 звеньев а-аминокислот ( с мол. [33]
Основное внимание было уделено препаративным способам разделения аминокислот в гидролизатах белков на группы нейтральных, кислых и щелочных продуктов и хроматографическому разделению аминокислот в пределах каждой из этих групп и в исходных смесях. [34]
Потребность в анализе индивидуальных аминокислот в физиологических жидкостях, гидролизатах белков и т.п. такова, что ныне серийно выпускается целый ряд анализаторов с автоматическим управлением последовательностью аналитических операций. В этой методике с помошьк коллектора фракций элюат делится на большое число фракций, каждая из которых анализируется колориметрически с нингидрином. Почти все аминокислоты определяются по поглощению излучения с длиной волны 570 нм. Для определения пролина и оксипролина используется излучение с длиной волны 440 нм. Хотя последующие исследователи внесли много усовершенствований в технику ионного обмена, методика, описанная Муром, Спекманом и Стейном [5], стала основой для большинства серийных автоматических анализаторов. Разделение и последующее определение обычных аминокислот в гидролизатах белков проводится двухколоночным способом. После завершения разделения колонка регенерируется 0 2 М гидроокисью натрия. Поскольку эта колонка элюируется полностью, повторно ее используют без регенерации. Обе колонки работают при 50 СС. Индивидуальные фракции анализируют с помощью цветной реакции с нингидрином. Более детально методика разделения аминокислот обсуждается в оригинальной статье. [35]
Уже давно известно, что некоторые аминокислоты появляются в гидролизатах белков ранее, чем другие. Так, например, при гидролизе казеина лейцин отщепляется очень быстро, в то время как отщепление валяна происходит значительно медленнее. Результаты этих исследований показывают, что распределение аминокислот в глобулярных белках далеко не однородно. [36]
Штейерле и Хилле [632, 643] разделяли на колонке с нейлоновым порошком гидролизаты динитрофенилированных белков шерсти и определяли концентрацию каждой ДНФ-аминокис-лоты в элюате фотометрически при 366 нм. Их метод был использован и другими авторами [284, 285] также для изучения аминокислотного состава различных видов шерсти. [37]
Штейерле и Хилле [632, 643] разделяли на колонке с нейлоновым порожком гидролизаты динитрофенилированных белков шерсти и определяли концентрацию каждой ДНФ-аминокис-доты в элюате фотометрически при 366 нм. Их метод был использован и другими авторами [ 284, 2853 также для изучения аминокислотного состава различных видов шерсти. [38]
Структуры всех 20 нормальных аминокислот ( компонентов, выделенных из гидролизатов белков) были установлены к 1935 г.; самым первым Браконно в 1820 г. был охарактеризован глицин, самым последним - треонин. Хотя цистеин входит в состав многих пептидов и белков как таковой, Однако их функционирующие формы содержат окисленный продукт - цистин, дисульфидные мостики которого могут образовываться как внутри -, так и межмоле-кулярно. За исключением глицина, все кодируемые аминокислоты белков оптически активны и одинаково хиральны при асимметрическом а-углеродном атоме. За исключением цистеина, конфигурация всех аминокислот соответствует S-конфигурацни по системе Кана-Ингольда - Прелога; положение серы в цистеине таково, что / - - цистеин имеет - конфигурацию. [39]
Известны 22 аминокислоты, которые регулярно или часто встречаются в гидролизатах белков. [40]
Дело в том, что профиль был получен в результате фракционирования кислотного гидролизата белка, а триптофан при этом разрушается. [41]
В табл. 9 приведены система растворителей, которые применялись для хроматографии энзиматических гидролизатов белков. [42]
Обратнофазовую гидрофобную хроматографию используют обычно для разделения относительно мелких пептидов, например трипсиновых гидролизатов белка. Ввиду наличия в составе пептидов как гидрофобных, так и гидрофильных аминокислотных остатков их взаимодействие с гидрофобизированной матрицей оказывается не слишком сильным, и в практике встречаются режимы хроматографи-ческой элюции, сходные с описанными для ФТГ-АК. [43]
Так, Ханкок и соавторы еще в 1978 г. описали фракционирование трипсинового гидролизата белка актинидина на колонке р Bonda-pak - G18 ( 0 4 X 30 см) в течение 15 мин со скоростью 1 5 мл / мин линейным градиентом ( 5 - 20 %) раствора ацетонитрила в 0 1 / о-ном водном растворе ортофосфорной кислоты. [44]
Насколько известно, этот метод не применялся для определения лизина в гидролизатах белка. [45]