Cтраница 3
Из общего количества азота N, выраженного в граммах, содержащегося в 100 г белка, вычитают количество N непептидного азота, содержащегося в виде аминной или гуанидиновой группы ( орнитин, лизин, аргинин), амидной группы ( аспарагин, глутамин) или в гетероциклах ( гистидин, триптофан); этот непептидный азот определяется особыми методами. Разность N-N, отнесенная к атомному весу азота, дает число молей аминокислот в 100 г белка. [31]
Благодаря высокой стабильности тозильного остатка в условиях отщепления защитных групп уретанового типа эта защитная группа часто применяется для блокирования Г4ш - аминофункций, как, например, гуанидиновой группы аргинина. Проблема детозилирования еще ждет своего окончательного решения. [32]
Кроме того, оказалось, что, вводя в организм животных аргинин, содержащий стабильный изотоп азота в амидиновой группе, удается обнаружить большое количество меченого азота в гуанидиновой группе креатина. Очевидно, что при этом происходит перенос амидиновой группы ( трансамидинирование) аргинина на гликокол и образуется гликоциа-мин. [33]
Некоторые пептиды из трипсиновых гидролизатов содержат больше аргининовых, чем лизиновых концевых групп; обработка 50 % - ным гидразином при 75 С в течение 15 мин приводит к удалению гуанидиновой группы и превращению в орнитин. После этого присоединение к смоле с помощью фенилендиизотиоцианата протекает так же, как и для пептидов, содержащих лизин. Поскольку сс-аминогрупны подвергаются тиокарбамоилированию, первую обработку фенилизотиоцианатом опускают. Обработка кислотой вызывает первый разрыв, однако 2-анилинотиазолинон - 5, соот - ветствующий первому остатку, остается присоединенным к смоле. Таким образом, / V-концевой остаток необходимо идентифицировать каким-либо другим методом, например, с помощьр методики Эд-мана. Никакие тиогидантоиновые производные лизина не могут быть определены этим методом. Если этот метод используют для пептидов из трипсиновых гидролизатов, где лизин или орнитин являются С-концевыми, то никаких пробелов в определении последовательности после Af-концевого остатка не происходит. Пептиды, образующиеся из белков в результате разрывов другого типа, могут содержать некоторое количество лизиновых остатков в цепи, а не на С-концах. Присоединение к смоле включает все или большинство остатков лизина, и в итоге при определении последовательности по Эдману могут возникнуть трудности. Когда последовательная деградация доходит до последнего остатка лизина, весь оставшийся пептид отделяется от смолы и теряется. [34]
Несмотря на то, что в последнее время для синтеза аргнгашоодвр-жащих пептидов широко попользуют аргинин оо свободной гуанидинсвой функцией, т.е. аргинин в протонированнсй форме, во многих случаях удобнее работать о блокированной гуанидиновой группой. Наиболее ре пространешшми защитными группировками ее являются нитро -, дикарбо-бензокси - и тозильная группы. [35]
Наиболее удобным считается синтез через 5-диметиламинометилфурфурилтиоэтиламин ( 24) Последний также используется в производстве другого противоязвенного средства лупитидина ( 26), введенного в медицинскую практику через год после появления зантака в 1987 г. Оказалось, что диа-минонитроэтиленовый фрагмент, содержащийся в ранитидине, можно легко заменить на аминопиримидиновый ( формально содержит гуанидиновую группу) с сохранением высокого уровня полезного биодействия. [36]
Пролин дает монокарбоксиметилпроизводное; глутаминовая кислота и фенилаланин частично образуют монопроизводное; следы монопроизводного образует аспарагиновая кислота. Гуанидиновая группа не реагирует; ход реакции с серином, треонином, цистином и триптофаном не вполне ясен. Из такого пептида, как Ала-Лиз - Ала, может быть выделено е-дикар-боксиметилпроизводное лизина. Тирозин образует два производных, у обоих из них фенольные гидроксильные группы карбокси-метилированы. Цистеин и гистидин также образуют производные по своим специфическим функциональным группам. [37]
Защитную группу удаляют затем каталитическим гидрогенолизом. Почему гуанидиновая группа легко подвергается электрофильному замещению. [38]
Интересно отметить, что гуанидиновые группы играют активную роль в осуществлении бактериостатического действия стрептомицина на туберкулезные бациллы. Изъятие гуанидиновых групп ведет к инактивации стрептомицина. [39]
Основность гуанидиновой группы намного выше основности аминогруппы эфиров аминокислот; эта разница в основности позволяет в ходе пептидного синтеза селективно блокировать гуанидиновую группу протонированием. Андерсон [42] получал пептиды из бромгидрата № - карбобензокси-ь-аргинина с помощью тетраэтилпирофосфита в диэтилфосфите. [40]
Эта реакция указывает на присутствие в белке гуанидиновой группы аргинина. [41]
При нитровании белков нитрогруппа входит, главным образом, в ядро тирозина и триптофана. При определенных условиях нитрование распространяется также и на свободные гуанидиновые группы аргинина. [42]
Атом азота аминогруппы выведен из плоскости карбоксильной группы на 0 280 А. Вторую группировку образуют атомы углеродной цепи и все атомы гуанидиновой группы, включая и атомы водорода. [43]
С этими выводами согласуются и результаты периодатного окисления стрептидина. При изучении этой реакции было установлено312 что в процессе окисления исчезают свободные гуанидиновые группы ( отрицательная реакция Сакагуши), а продукты окисления дают положительную реакцию Паули на имидазольное кольцо. [44]
Титрование от рН 8 5 до рН 6 5 обусловлено взаимодействием протонов с имидазольными группами гистидина и с концевыми а-аминогруппами, которые присутствуют в белке в небольшом количестве. Аргинин при титровании непосредственно не определяется, так как константа диссоциации гуанидиновой группы настолько высока ( р / Сз несколько выше 13), что эта группа при любом значении рН, допускающем точные измерения, не может в заметном количестве перейти в ионизированную форму. Поэтому максимальное связывание основания белком нельзя определить достаточно точно. [45]