Cтраница 4
Для существенного улучшения эффективности разделения и параметров количественной оценки используют предварительное разделение. Полученную промежуточную кольцевую зону сравнительно малого диаметра затем разделяют основным элюентом. На обычных пластинках со слоем силикагеля эту операцию проводят с элюентами, достаточно полярными для разделения всех присутствующих компонентов, или в случае использования системы с обращенными фазами применяют достаточно неполярные элюенты. Его вводят в центр пластинки на слой сорбента, расположенного сверху подложки, пипетками Барольера или капиллярами. При этом фронт элюента продвигается через нанесенные пятна проб на расстояние 1 - 2 мм. В случае когда не все компоненты анализируемой смеси продвигаются вместе с фронтом растворителя - а так чаще всего и бывает па практике - предварительное разделение проводят несколько раз, следя за тем, чтобы длина пути разделения была постоянной. [46]
После того как связующее ( алебастр) затвердевало, пластинки сушили в печи при 115 - 135 С. Высушенные пластинки выдерживали на воздухе в течение примерно 12 ч, защитив их от попадания яркого света. Используя многократное ( Х2) элюирование, в этой системе можно разделить на группы 2 4 - ДНФГ-производные насыщенных и ненасыщенных ( в положениях 2 и 2 и 4) альдегидов. Сначала лучше удалить производные кетонов, с этой целью первое хроматографирование проводят на слоях оксида алюминия. Члены одного гомологического ряда разделяют методом распределительной хроматографии. Слои кизельгура пропитывают, погружая в 10 % - ный раствор 2-феноксиэтанола в ацетоне. Чтобы улучшить разделение, пробу элюируют несколько раз; так, например, элюируют а 9 см и один, четвертый, раз на расстояние 11 см. Такая методика обеспечивает разделение отдельных членов любого гомологического ряда. Если смеси, однако, содержат члены более чем одного гомологического ряда, возможно перекрывание пятен в одном измерении. Элюированне смесью петролейный эфир-диэтиловый эфир ( 96: 4) ведут до края пластинки; таким образом, длина пути разделения составляет примерно 16 см. Пластинку извлекают из камеры, дают растворителю испариться и затем вновь погружают в тот же растворитель и проводят повторное элюирование в том же направлении и на то же расстояние. Затем пластинку извлекают и после испарения растворителя пропитывают, погружая в 10 % - ный раствор феноксиэтанола в ацетоне. Необходимо следить за тем, чтобы при пропитке не смылись пятна, полученные в результате первого разделения. На этой первой пластинке удается идентифицировать все кетоны, за исключением ацетона, который не подчиняется общей закономерности и обнаруживается с низшими альдегидами. [47]
Если на бумагу нанесены полиамидные смолы и разделение происходит по ионообменному механизму, то в качестве элюента применяют воду или смеси воды с полярными органическими соединениями. При использовании чистой бумаги элюентом может быть любая жидкость, способная к перемещению по бумаге, чаще всего смесь воды и органических соединений. Критерием при выборе элюента может служить растворимость в нем определяемого вещества. В качестве относительного универсального элюента для БХ можно рекомендовать систему, представляющую собой верхний слой смеси уксусная кислота - н-бутанол - вода ( 1: 4: 5) после расслоения. На рис. 1.19 представлены два вида хроматографии в зависимости от направления движения элюента. На рис. 1.19, а изображен восходящий вариант разделения, при котором лист бумаги опускают в элюент на глубину 5 мм и подвижная фаза поднимается по бумаге за счет капиллярных сил. Эффективность разделения этого метода ограничена, поскольку элюент не поднимается выше чем на 20 - 22 5 см из-за действия силы тяжести. Для проведения нисходящего метода ( рис. 1.19, б) требуется несколько более сложное оборудование, в том числе емкость для элюента, укдепленная в верхней части камеры для разделения, а также стержень для предотвращения сифонного эффекта. В этом методе силы тяготения помогают, а не мешают разделению. Rf, так как длина пути разделения не ограничена и элюент может даже стекать с нижнего края листа бумаги. Лист бумаги можно размещать и горизонтально как в линейном, так и в круговом вариантах. В линейную горизонтальную систему элюент подают с помощью бюретки или фитиля на один из краев бумажной полосы. В круговом варианте пробу и элюент подают в центр хромато-граммы. Одним из преимуществ горизонтального варианта является относительная компактность оборудования, позволяющая помещать систему целиком в сушильный шкаф, термостат или холодильник. Двумерное разделение проводят так же, как и в ТСХ: после лроведения процесса в одном направлении хроматограмму высушивают и разделение проводят новой системой растворителей в направлении под прямым углом к первому. [48]