Cтраница 4
![]() |
Зависимость скоростей реакций различных нуклеофилов с п-нит. [46] |
ГГ - глицилглицин; ИМ - имидазол; АГК - - аце-тогидроксамовая кислота; БГК-ч-бутилгидроксамовая кислота; АХГ-анион хлоралгидрата ( при 30 С); ИНА - изонитрозоацетон; СА - салицилальдоксим; МАН - меркаптоацетат натрия; АО - ацетоксим; МЭ - меркаптоэтанол; ИНАА - изонитрозоацетилацетон; ЭДА - этилендиамин; ОФИ - N-оксифталимид; БА - mpem - бутиламин; К - карнозин; Трис - трис - ( оксиметил) - аминометан. Воспроизведение рисунка разрешено Американским химическим обществом. [47]
Карнозян ( р-аланилгистидин) - соединение, относящееся к азотистым экстрактивным веществам. В - мышцах животных содержание карнозина составляет 0 2 - 0 3 % от сырого веса. Биологическая функция карнозина не выяснена. [48]
Пятна карнозина приобретают интенсивно оранжевую окраску. Окрашенные участки хроматограммы вырезают и элюируют 1 % - ным раствором соды. Пользуясь стандартным раствором карнозина, строят калибровочный график и рассчитывают содержание дипептида в микромолях на грамм ткани. [49]
Раствор нингидрина наливают в ванночку и равномерно пропитывают им хроматограмму. Затем ее высушивают под тягой и помещают в термостат при 110 С на 5 - 10 мин. При этом пятна карнозина и анзерина приобретают серо-голубую окраску. Элюцию проводят реактивом № 7 в темноте в течение 2 - 3 ч и затем колориметрируют при 582 нм. [50]
В пробирку вносят шпателем кусочек мышцы и добавляют 15 - 20 капель воды. Пробирку нагревают у пламени горелки 20 - 30 сек. При этом белки мышц денатурируются, а карнозин переходит в мышечный экстракт. Полученный экстракт отделяют фильтрованием. Отфильтровав 4 - 5 капель жидкости, добавляют к ним столько же капель диазо-реактива и по каплям раствор едкого натра до появления оранжево-красного окрашивания. [51]
На листе хроматографической бумаги нужного размера на расстоянии 4 см от нижнего края проводят стартовую линию, на которую наносят исследуемый раствор, содержащий дипептиды. Безбелковый экстракт ткани после упаривания на роторном испарителе чаще всего растворяют в смеси НСООН-СНзСООН-Н2О ( 7: 5: 13) или в 10 % - ном изопропаноле, чтобы 1 мл раствора соответствовал 1 5 - 2 г ткани и наносят на хро-матограмму небольшими порциями ( 0 01 - 0 03 мл), подсушивая бумагу теплым воздухом. На эту же хроматограмму наносят стандартные растворы карнозина и анзерина, содержащие по 0 03 - 0 05 мкмоль в пятне. Бумагу сшивают в виде цилиндра ( следят, чтобы края не соприкасались) и помещают в хроматографическую камеру в строго вертикальном положении. Когда фронт растворителя дойдет до верхнего края бумаги, хроматограмму вынимают и высушивают под тягой в течение 2 - 3 сут. От следов фенола хроматограмму отмывают горячим ацетоном. Для этого сухую хроматограмму сворачивают трубочкой, перевязывают ниткой, помещают в цилиндр, заливают кипящим ацетоном и оставляют на 10 - 15 мин; промывание повторяют 2 - 3 раза. [52]
Экстрактивными веществами называются органические вещества, растворимые в воде, содержащиеся в ткани в незначительном количестве. Они могут быть обнаружены только-в концентрированных вытяжках - экстрактах. К экстрактивным веществам относятся: аденозинтрифосфорная, аденозин-дифосфорная, адениловая кислоты, креатин, креатинфосфат, карнозин, ансерин, карнитин, аминокислоты, молочная кислота и другие соединения. [53]
Он присутствует в мышцах многих позвоночных. По своему строению этот дипептид представляет р-аланилгистидин. Его роль, связь с белком, существование и распад, роль его фосфорных производных изучаются Севериным. Последний доказал, что карнозин влияет на скорость обмена фосфорных соединений в мышцах. [54]
Природные а-аминокислоты существуют в виде оптически деятельных D и L-изомеров ( стр. В процессе развития в живом организме выработалась высокая степень селективности в выборе того или иного изомера, что играет большую роль, как при усвоении природных питательных веществ, так и при медикаментозном лечении. Известны примеры, когда фармакологическая активность D-изомера в десять раз превосходит активность L - изомера и обратно. Не случайно поэтому то, что в животном организме содержатся главным образом оптически активные а - аминокислоты. Исключением является р-аланин, входящий в состав природного дипептида карнозина ( стр. Интересно также, что в белках растительного и животного происхождения содержатся а-аминокислоты только L-ряда. [55]