Cтраница 4
На рис. 4.7 представлена схема образования промежуточного фермент-субстратного комплекса. [46]
Наряду с различиями в зарядах фермента и фермент-субстратного комплекса на эффективность элюирования влияют также сила связи между ферментам и ионообменником и сродство фермента к аффинному лиганду. [47]
Стабильные иминоксилы могут оказаться полезными при исследовании фермент-субстратных комплексов. После установления равновесия между ферментом и субстратом в реакциях гидролиза под действием а-химотрипсина, фермент-субстратный комплекс распадается на п-нитрофенол и ацилкоэнзим, который в свою очередь выделяет субстрат и кислоту. Берлинер и Мак-Коннелл [50] использовали в качестве субстрата для этой реакции н-нитрофе-ниловый эфир 2 2 5 5-тетраметил - 3-карбоксипирролидин - 1-окси-ла и им удалось выделить небольшое количество парамагнитного ацилкоэнзима. Спектр ЭПР фермент-субстратного комплекса свидетельствовал о том, что спин-метка жестко фиксирована относительно молекулы фермента. При рН 6 8 комплекс распадался и появлялся сигнал ЭПР, характерный для свободной иминоксиль-ной метки в растворе. [48]
Чисто ковалентного связывания неизмененного субстрата при образовании фермент-субстратного комплекса, по-видимому, не происходит. Однако известны случаи, когда фермент все же образует ковалентно связанные промежуточные соединения с переносимыми в ходе реакции группировками, принадлежащими субстрату. В некоторых случаях переносимой группировкой является один атом, в других - вся молекула субстрата, за исключением одного атома. Важно, что этот ковалент-ный тип промежуточного соединения, образующегося путем разрыва связи в молекуле субстрата и образования новой связи между ферментом и фрагментом субстрата, качественно отличен от простого фермент-субстратного аддитивного комплекса. Важные кинетические следствия этого различия мы рассмотрим в гл. [49]