Мембранные белок

Cтраница 2

При очистке мембранных белков детергенты бывают необходимы и для экстракции белка из липидного окружения мембраны, и для поддержания его ферментативной активности в растворе ( в какой-то мере имитируя это липидное окружение), и, наконец, в процессе самой гидрофобной хроматографии. Экспериментатору приходится гибко манипулировать последовательным выбором природы и концентрации различных детергентов для решения всех этих задач. [16]

Анализ аминокислотной последовательности бетка, радиоактивно меченного по отдельным аминокислотам. [17]

При изучении мембранных белков необходимо принимать во внимание присущие им необычные свойства. Высокое сродство этих белков к липидам и гидрофобность приводят к практически полной их нерастворимости в водных средах. Пептидные фрагменты, полученные при гидролизе мембранных белкоа, также плохо растворимы и обладают повышенной склонностью к агрегации. [18]

Для солюбилизации мембранных белков часто используют неионные детергенты, такие как тритон Х-100, твин-80 и др. Эти детергенты влияют на развитие окраски при определении белка с биуретовым реактивом и методом Лоури. [19]

Модель Синджера - с она. [20]

По своему аминокислотному составу типично мембранные белки часто не отличались от обычных водорастворимых белков. Это подтверждало предположение о том, что особенностью мембранных белков является характерная последовательность расположения гидрофобных и гидрофильных аминокислотных остатков в поли-пептидной цепи. [21]

Разборка и сборка мембраны с ппмощью детергентов. [22]

С помощью разнообразных методов фракционирования мембранные белки в солюбнлнзнроаанной форме могут быть разделены и очищены до индивидуального состояния. Последующее удаление детергента в присутствии подходящих фосфолнпндов позволяет реконструировать в искусственной мембране ту или иную функцию изучаемого белка. В таблице 23 приведены структурные формулы н названия детергентов, наиболее часто используемых для солюби-лнзвцин и реконструкции мембран. [23]

В отличие от липидов у мембранных белков нет единого способа структурной организации. Вероятно, часть белков лишена ферментативной активности и участвует только в поддержании мембранной структуры. В то же время доказано, что для осуществления белками некоторых функций необходима их строго упорядоченная взаимная организация в мембране. [24]

Весьма эффективным методом уточнения топографии мембранных белков, прежде всего точной локализации внемембранных участков, является использование моноклоиальных антител. Для получения гибридом использовались фрагменты бактериородопсина, полученные путем его расщепления протеолити чески ми ферментами. Наиболее ценными в этом случае оказались синтетические фрагменты: коррелируя величину синтетического пептида и эффективность связывания соответствующего антитела, можно с высокой степенью достоверности зондировать выступающие ич мембраны полипептндные петли. [25]

Для образования белков аппарата фотосинтеза необходимы мембранные белки, способные поглощать свет. Мембранные белки содержат большое кол-во структурной информации: на боковых поверхностях молекулы белка расположены гидрофобные аминокислотные остатки, а на торцевых - гидрофильные. Каждый столб содержит ок. Благодаря этому половина поверхности а-стгарального столба оказывается сплошь гидрофобной; именно такие столбы образуют боковую поверхность бактеркородопсина. [26]

Следует отметить, что не все мембранные белки синтезируются на мембраносвязанных рибосомах и, следовательно, входят в мембрану ко-трансляционно. Например, цитохром bs и NADH-цитохром - bs - редуктаза синтезируются на свободных рибосомах и инкорпорируются в мембраны посттрансляционно. Эти белки, будучи освобождены из рибосом в цитоплазму в виде завершенных цепей, имеют высокое сродство к мембранам ( возможно, за счет гидрофобного С-концевого домена) и легко вступают с ними во взаимодействие в их свернутом виде, независимо от рибосом. [27]

Мобильными являются 20 - 50 % мембранных белков, остальные имеют ограниченную подвижность или совсем неподвижны. [28]

Аналогичным путем определены также структуры таких мембранных белков, как цитохромоксидаза. [29]

Последнему приписывают внутриклеточную функцию возможного связывания других мембранных белков или цитоскелета. [30]

Страницы: 1 2 3 4 5