Адсорбция - белок
Cтраница 3
На гидроксилированной поверхности кремнезема адсорбция белков происходит практически необратимо. Необходимо резко снизить адсорбцию белков, сохранив возможность смачивания водными растворами. [31]
В кислой среде поверхность модифицированного силохрома за счет этих аминогрупп заряжена положительно. Таким образом, уменьшение адсорбции белков на модифицированном силохроме может быть связано не только с экранировкой силанольных групп, но и с электростатическим отталкиванием. [32]
Бентониты уже давно применяются в производстве сидра для удаления мути в ходе кондиционирования. Механизм их действия заключается не только в адсорбции белков, но и в способности бентонитов образовывать в растворе слабо связанные матрицы, охватывающие коллоидные частицы и притягивающие частицы с противоположным электрическим зарядом. [33]
После обычного электрофоре-тического разделения в желобок, вырезанный вдоль геля, вносят иммунную антисыворотку и предоставляют ей возможность диффундировать в поперечном направлении к фракционированным зонам белка. Применение агара в этом методе предпочтительно ввиду: 1) малой адсорбции белков, несмотря на относительно грубую структуру геля; 2) сравнительно большого свободного объема, приближающегося к объему при свободном электрофорезе, а также 3) простоты манипуляций с этим гелем. Агар, как сильно кислое вещество, при использовании в щелочных буферах вызывает значительный эн-досмотическин поток, который, пожалуй, является наибольшей помехой. Как п при использовании крахмального геля, еще мало известно о тех веществах, которые могут выщелачиваться и соединяться с белками или тем или иным путем загрязнять их. Тем не менее этот метод имеет значительную ценность в области иммунологии и клинической биохимии; в работах по изучению белков он дает дополнительные сведения о чистоте и гомогенности исследуемых препаратов. [34]
Адсорбция альбумина ( молекулярная масса 68 тыс) и папаина ( 23 тыс.) носит активированный характер, причем в исследованном интервале температур ( 5 - 50 С) максимальная величина адсорбции альбумина наблюдается при 37 С; в случае папаина она непрерывно растет от 250 до 800 мг / г. Величина активационного барьера, рассчитанная по изостерам адсорбции, достигает 100 кДж / моль для альбумина. Столь высокое значение, однако, не вызывает удивления, так как адсорбция белков, вероятно, является многоточечной и осуществляется посредством взаимодействия с поверхностью аминокислотных фрагментов, количество которых в молекуле белка может достигать нескольких сотен. [35]
 |
Раздавленный корневой волосок Hydrocharis. [36] |
Аналогичных исследований впоследствии было сделано множество на различных объектах как растительного, так и животного мира. Было признано, согласно исследованиям Рамсдена, что эта оболочка возникает в результате адсорбции белка на поверхности голой капли протоплазмы на границе протоплазма - вода. Считалось, что адсорбционное накопление белка вызывает его поверхностную коагуляцию. [37]
В качестве буферных веществ могут служить также цвиттерионные молекулы ( внутренние соли), которые обладают большой буферной емкостью, но не вносят значительного вклада в общую электропроводность системы. Цвиттерионы могут образовывать ассоциаты с белками и поверхностью капилляра и, тем самым, уменьшать адсорбцию белков. За счет применения аминосульфоната, аминосульфата и, в последнее время, фосфонийсульфоната в очень высоких концентрациях в качестве добавок к фосфатному буферу в нейтральных условиях можно разделять как основные, так и кислые белки. [38]
В главе об электрокинетических явлениях мы указали, что при микроэлектрофоретическом измерении подвижности белков пользуются адсорбцией белков из растворов на инертных частицах, например на измельченном кварце, которые должны иметь достаточные размеры, чтобы быть видимыми в микроскоп. Несмотря на большой интерес и важность этого вопроса, имеется мало количественных работ по адсорбции белков. [39]
Таким образом, задача сейчас состоит в том, чтобы найти истинную картину явлений, происходящих на ртутном электроде и определяющих наблюдаемое соотношение каталитических волн. В работе [4] было показано, что белки необратимо адсорбируются вплоть до потенциала - 1 7 в на ртутном электроде, и доказано, что адсорбция белка сопровождается его расплющиванием до пленки толщиной 4 - - 6 А. Этот последний факт является особенно важным для дальнейшей интерпретации всех рассматриваемых явлений, он впервые представлен и обсуждается в литературе по полярографии белков, и поэтому было целесообразно провести исследование адсорбированного белка другим независимым методом. Наиболее подходящим для этой цели является метод измерения дифференциальной емкости двойного слоя. [40]
Экстракция растворимых белков из тканей может происходить только после разрушения клеточных оболочек, так как последние непроницаемы для больших белковых молекул. Разрушения клеток можно достичь механическим путем, растирая их с песком или с кизельгуром; однако при этом наблюдается некоторая потеря белка за счет денатурации, вызываемой адсорбцией белка на силикате. По этой причине лучше разрушать клетки такими приборами, как мясорубка Латапи или гомогенизаторы. Структура клетки разрушается также при действии органических растворителей, например спирта, ацетона или глицерина. Если концентрация глицерина не превышает 85 %, то в глицериновый экстракт переходит значительная часть растворимого белка. [41]
Рассмотрим сначала наиболее простой случай развития межфазной прочности водных растворов глобулярных белков на границе с воздухом. Известно, что в водных растворах молекулы яичного альбумина, сывороточного альбумина и казеина находятся в виде глобул и большинство неполярных групп создают гидрофобные области внутри глобулы. При адсорбции белка на поверхности в результате избытка свободной энергии на границе раздела фаз происходят конформационные изменения адсорбированных молекул, так как нарушается равновесие сил, стабилизирующих глобулу. Развертывание макромолекул на границе раздела фаз сопровождается глубокими изменениями в третичной структуре, вследствие чего большинство гидрофобных групп ориентировано к воздуху. Агрегация денатурированных макромолекул и обусловливает нарастание прочности межфазного адсорбционного слоя. Возникающий при агрегации макромолекул тип структуры, образованный множеством межмолекулярных гидрофобных связей, напоминает р-структуру параллельного типа. Фришем, Симхой и Эйрихом [153-155] для разбавленных растворов полимеров была разработана модель структуры адсорбционного слоя, по которой гидрофобные участки макромолекул обращены в газовую фазу, тогда как остальная часть адсорбированной макромолекулы образует как бы свободные петли и складки. Эта модель также не исключает возможности образования межмолекулярных связей, приводящих к возникновению межфазных прочных структур. [42]
 |
Разделение стандартных белков в различных буферных системах. Условия. прибор самодельный с быстросканирую-щим детектором, капилляр 50 мкм, 37 / 44 см, поле. 341 В /. [43] |
При использовании катионных детергентов, например, ЦТАБ, формируется двойной электрический слой, в котором положительные заряды направлены внутрь капилляра. Тем самым достигается обращение ЭОП. Вследствие того, что поверхность заряжена положительно, адсорбция катионных белков тормозится электростатическим отталкиванием от стенки. При этом в случае основных белков достигается большое число ступеней разделения и симметричность пиков. [44]
 |
Схематическая кривая филь - диализа. [45] |
Страницы: 1 2 3 4