Cтраница 3
Реакция обусловлена присутствием в белке циклической аминокислоты тирозина, которая при взаимодействии с реактивом Миллона дает ртутную соль своего нитропроизвод-ного, окрашенную в красный цвет. Белки, не содержащие тирозина ( желатина, клупеин, сальмин и др.), не дают реакции Миллона. Если реакцию Миллона производят с раствором тирозина или с растворами полипептидов, содержащих тирозин, то осадок не образуется, но жидкость равномерно окрашивается в красный цвет. Эту реакцию широко используют для количественного определения тирозина в гидро-лизатах белка и для определения некоторых производных тирозина, дающих эту реакцию. [31]
Биуретовая, реакция состоит в том, что при нагревании раствора белка со щелочью в присутствии нескольких капель сульфата меди появляется фиолетовое окрашивание. Ксантопротеиновая реакция отличается появлением желтого окрашивания при действии на белок азотной кислоты. Наконец, реакция Миллона дает розово-красное окрашивание при нагревании белков с концентрированным раствором нитрата ртути в азотной кислоте. [32]
Методы выделения и очистки белков: классические - диализ, высаживание из растворов; современные - распределительное и ионообменное хроматографирование, хроматографирование на молекулярных ситах, электрофорез. Цветные реакции белков: биуретовая, ксантопротеиновая, нингидринная, реакция Миллона. [33]
Доказательством того, что приведенные цветные реакции являются реакциями не на всю белковую молекулу в целом, а на отдельные аминокислоты, является то, что белки, не содержащие циклических аминокислот, не дают перечисленных реакций. Белок, не содержащий тирозина, не дает реакции Миллона, белок, не содержащий триптофана, не дает реакции Адамкевича. Желатина, содержащая ничтожное количество тирозина и триптофана, не дает реакций Миллона и Адамкевича. [34]
Доказательством того, что приведенные цветные реакции являются реакциями не на всю белковую молекулу в целом, а на отдельные аминокислоты, является то, что белки, не содержащие циклических аминокислот, не дают перечисленных реакций. Белок, не содержащий тирозина, не дает реакции Миллона, белок, не содержащий триптофана, не дает реакции Адамкевича. Желатин, содержащий ничтожное количество тирозина и триптофана, не дает реакций Миллона и Адамкевича. [35]
Нагревание белков или кипячение их водных растворов вызывает необратимое свертывание. С кислотами и щелочами белки образуют солеподобные соединения. Для аналитического определения белков существует несколько весьма чувствительных и характерных цветных реакций, например биуретовая реакция, ксантопротеиновая, реакция Миллона. [36]
Другая цветная реакция на белки носит название реакции Миллона. При приливапии к раствору белка реактива, действующим началом которого является смесь азотнокислых и азотистокислых солей окиси и закиси ртути, белок сначала выпадает в осадок, а затем при нагревании окрашивается в кирпичи о-к р а с н ы и цвет. Эта реакция характерна для фенольного ядра тирозина, вследствие чего белки, содержащие в своем составе тирозин, дают реакцию Миллона. [37]
Другая цветная реакция на белки носит название реакции Миллона. При приливании к раствору белка реактива, действующим началом которого является смесь азотнокислых и азотистокислых солей окиси и закиси ртути, белок сначала выпадает в осадок, а затем при нагревании окрашивается в кирпич и о-к р а с и ы и цвет. Эта реакция характерна для фенольного ядра тирозина, вследствие чего белки, содержащие в своем составе тирозин, дают реакцию Миллона. [38]
При добавлении к раствору тирозина реактива Миллона ( содержащего смесь азотнокислых солей окиси и закиси ртути) раствор окрашивается в красный цвет. Эта реакция обусловлена наличием в тирозине свободного фенольного гидроксила. Ее дают и белки, содержащие тирозин. Реакция не является строго специфичной, так как ее дают и некоторые другие фенолы. Однако в условиях изучения аминокислотного состава гидролизатов белков реакция Миллона может рассматриваться как специфичная для тирозина, ибо белки не содержат других веществ, которые содержали бы фенольный гидроксил. [39]
Реакция Миллона открывает в белке циклическую аминокислоту тирозин. При добавлении к раствору белка реактива Миллона, состоящего из смеси азотно - и азотистокислых солей закиси и окиси ртути, растворенных в концентрированной азотной кислоте, образуется белый осадок ( действие соли тяжелого металла), окрашивающийся при нагревании в красный цвет. Реактив Миллона дает окрашивание почти со всеми фенолами, причем у белков реакция обусловлена присутствием в них фенольной группы тирозина. Белки, не содержащие тирозина, этой реакции не дают. Следует избегать прибавления избытка реактива Миллона, поскольку он содержит азотную кислоту, которая при взаимодействии с белком может дать желтое окрашивание ( ксантопротеиновую реакцию), маскирующее реакцию Миллона. [40]