Cтраница 3
Из каждой фракции отбирают по 0 2 мл элюата, проводят щелочной гидролиз и затем ставят нингидриновую реакцию ( см. стр. [31]
Если концентрацию фракционируемых веществ не удается определить спектрофотометрически, то полученные фракции можно подвергнуть щелочному гидролизу и проанализировать с помощью нингидриновой реакции ( см. стр. [32]
В то же время, если белок определять спектрофотометрически, в реакции может участвовать половина указанного количества антител, а при определении методом Фолина - Чиокальтеу или нингидриновой реакцией достаточно одной трети этого количества. В соответствии с этим объем иммунной сыворотки в центрифужной пробирке может варьировать от 0 5 до 4 0 мл. [33]
Пингидриновая реакция обусловлена наличием аминокислот, имеющих аминогруппы к и-положении. Нингидриновая реакция является одной из наиболее чувствительных для обнаружения а-аминогрупп. [34]
Рюэман) и в настоящее время остается важнейшим способом идентификации аминокислот на хрома-тограммах. Химизм нингидриновой реакции до сих пор подробно объяснить не удается. На первой стадии основной реакцией является реакция Штрек-кора - распад аминокислот с образованием углекислого газа, аммиака и альдегида, содержащего на один атом углерода меньше, чем в исходном аминокислоте. [35]
Наряду с нингидриновой реакцией, которая для этих соединении выражена очень слабо или требует нагревания до высокой температуры, проявление часто осуществляют реакцией с изатином. Особенно высоко содержание циклических иминов ( включая пролнн и оксипролип) в пыльце растений, что, по исей вероятности, связано с ее низкой влажностью. Из пирролидиновых производных мы приводим аллоок-сипролин, у-метилпролин и у-метилоксннролин. Азетидин-2 - карбоновая кислота содержит четырехчленный цикл. [36]
Поскольку поглощение при этой длине волны практически линейно зависит от числа исходных аминогрупп, на основе шшгидриновой реакции удалось разработать удобный колориметрический метод количественного определения аминов. Таким образом, нингидриновая реакция позволяет определять свободные аминокислоты даже в присутствии полипептидов. В случае имино-кислот ( пролина и оксипролина) образуется продукт ярко-желтого цвета с максимумом поглощения около 440 ммк. Это позволяет использовать нин-гидриновую реакцию для определения иминокислот в белковых гидроли-затах, содержащих большой избыток аминокислот. [37]
Как видно из уравнения реакции, в образовании цветного продукта принимает участие азот аммиака, образующегося из а-аминогруппы. Таким образом, нингидриновая реакция выявляет свободные а-аминогруппы. Чем больше свободных а-аминогрупп содержит белок, тем интенсивнее окраска, образующаяся при взаимодействии его с нингидрином. [38]
Элюат собирают фракциями по 1 мл с помощью автоматического коллектора. За ходом элюирования следят по нингидриновой реакции, которую проводят на фильтровальной бумаге с каплями элюата, отбираемыми из каждой фракции. [39]
Пептиды фракционируют с помощью градиентного элюирования. Элю-ат, вытекающий из колонки, собирают фракциями по 10 мл Нингидриновую реакцию ставят либо непосредственно с полученным элюатом, либо после его щелочного гидролиза. [40]
Окраска чувствительна к [ Н ], поэтому нингидриновую реакцию ведут в нейтральном растворе. Кроме того, следует иметь в виду, что аммиак и р-аланин также дают положительную нингидриновую реакцию. Чувствительность нингидриновой реакции может быть повышена добавлением аскорбиновой кислоты. [41]
За это время концентрация препаратов увеличивается. К каждой пробе прибавляют по 1 мл 30 % - ной уксусной кислоты и проводят нингидриновую реакцию следующим образом. [42]
Большой интерес представляет автоматическое устройство для определения концентрации пептидов в элюате. Для этой цели в работе Шредера используется универсальный автоматический анализатор - автоанализатор Техникой, который был специально изготовлен фирмой Technicon Chromatography C ( США) для определения пептидов с помощью нингидриновой реакции. Автоанализаторы выпускаются указанной фирмой в большом количестве для массовых автоматических лабораторных анализов главным образом в клинических биохимических лабораториях. Они универсальны и могут быть легко настроены на многие типы анализов, даже требующих для своего осуществления ряда последовательных химических реакций. [43]
Скорость элюирования аминокислот и пептидов в значительной степени определяется составом и величиной рН буферов. В дальнейшем они установили, что буферные растворы цитрата и ацетата натрия имеют определенные преимущества, поскольку при их использовании меньше разрушаются и теряются лабильные аминокислоты, легче осуществляется анализ вытекающего из колонки эффлюента с помощью нингидриновой реакции. [44]
К важнейшим из них относятся: биуретовая реакция ( пептидные связи), ксантопротеиновая реакция ( ароматич. Миллона реакция ( фенильная группа тирозина), Адамкевича реакция ( индольное кольцо триптофана), Паули реакция ( имидазольное кольцо ги-стидина), сулъфгидрилъная реакция ( серусодержащие остатки аминокислот), Сакаеучи реакция ( гуанидино-вая группа аргинина), нингидриновая реакция, пикриновая реакция. [45]