Cтраница 1
Белковый раствор, который вначале был заморожен в виде пленки на стенке сосуда, поддерживается в замороженном состоянии благодаря непрекращающейся возгонке паров воды, которые переходят в конденсатор. Скорость возгонки и перехода влаги должна быть, таким образом, достаточно большой для того, чтобы тепло отводилось от льда с такой же скоростью, с какой оно поступает из окружающего сосуд пространства. По этой причине слой льда распределяют в виде пленки, а сечение соединительной трубки делают достаточно широким для того, чтобы скорость прохождения по трубке паров воды не могла быть лимитирующим фактором. С помощью этого метода можно с успехом лиофилизовать растворы, содержащие этиловый спирт в концентрациях по крайней мере до 25 % ( объемн. Однако более низкие температура замерзания и теплота испарения водно-спиртовых смесей делают несколько затруднительным предотвращение плавления белкового раствора в условиях высушивания. Во всех случаях, даже в случае водных растворов, рекомендуется намораживать раствор на стенку сосуда при температуре, намного более низкой, чем температура замерзания раствора. Вакуум должен устанавливаться быстро, чтобы избежать плавления во время этого периода. [1]
Белковый раствор пропускают через гель се - фадекса. Содержание белка в обессоленных фракциях определяют либо по оптической плотности при 280 нм, либо в реакции осаждения белка трихлоруксусной кислотой. [2]
Белковый раствор коагулируется водным раствором ово - бодной кислоты ( отличие от ггиро - и ортофосфорной кислот), но не растворами щелочных метафосфатов. [3]
Прядильный белковый раствор содержит 20 - 30 % белков и 0 5 - 1 % NaOH. Удельный расход щелочи для получения прядильного белкового раствора значительно меньше, чем при приготовлении вискозы. Минимальное содержание щелочи имеет большое значение не столько для снижения ее расхода, сколько для уменьшения деструкции макромолекул белка при приготовлении и подготовке прядильного раствора к формованию. [4]
Если белковые растворы вращать на ультрацентрифуге с очень высокой скоростью, так, чтобы развить центробежную силу, приблизительно в 500 000 раз превосходящую силу земного притяжения, то белковые частицы будут оседать гораздо быстрее, чем при применении метода седиментационного равновесия. Если молекулярный вес белковых молекул высок, скоростью диффузии можно пренебречь, так как с увеличением молекулярного веса растворенного вещества скорость оседания возрастает, а скорость диффузии значительно уменьшается. [5]
Исследуемый белковый раствор неизвестного состава инкубируют со специфической иммунной сывороткой; образовавшийся преципитат удаляют центрифугированием, а надосадочную жидкость в качестве истощенной иммунной сыворотки используют при иммуноэлектрофорезе известной смеси белков. В полученной иммуноэлектрофореграмме будут отсутствовать именно те компоненты, которые являются общими для исследуемого белкового раствора и для известной смеси белков, так как они удалили из иммунной сыворотки соответствующие антитела. [6]
Устойчивость белковых растворов также сильно зависит от рН среды. [7]
Устойчивость белковых растворов сильно зависит от рН среды. Наличие зарядов на белке в кислой и щелочной области от изоэлектрической точки приводит к повышению гидратации белковых молекул и их растворимости. В изоэлектрической точке растворимость наименьшая и в этой точке белковые растворы обладают минимальной устойчивостью. Изменяя рН раствора белка в различных буферных системах, можно по минимуму растворимости определить изоэлектрическую точку белка. В минимуме растворимости частицы белка сильно агрегируют, и мутность раствора повышается; поэтому изоэлектрическую точку белков можно определить по максимуму помутнения. [8]
Каплю белкового раствора помещают на насыщенную буферным раствором полоску бумаги, а к электродам, помещенным на концах этой полоски, прикладывают разность потенциалов. [9]
Способность белковых растворов увеличивать или уменьшать диссоциацию находящихся в них солей, характеризуется - диэлектрической достоянной таких растворов ( D); чем выше полярность молекул, тем больше D; для растворов неполярных соединений величины D низкие. Существует обратнопропорциональная зависимость между D и силами электростатического притяжения и отталкивания молекул - возрастание D сопровождается стабилизацией молекул, снижение D - их притяжением и агрегацией. Напомним, что D для воды при 20 С равна - 80 - 82, дл. Зтиловый спирт используют в качестве фракционирующего агента белковых молекул. К тому же он дегидратирует эти молекулы. [10]
В белковом растворе рассеянный свет имеет большую интенсивность, чем в чистом растворителе. [11]
Добавление в белковый раствор соли вызывает частичное изменение третичной и четвертичной структуры молекул вследствие изменения электрокинетического потенциала и уменьшения степени гидратации белковых молекул, что приводит к их агрегации, степень которой различна для разных белков. На этом принципе, как указывалось выше, основывается фракционирование биополимеров. [12]
Добавление в белковый раствор ионов кальция приводит к созданию мостичных связей или комплексных соединений за счет водородных связей между цепями белковых молекул и тем самым способствует образованию разветвленных агрегатов. [13]
Методы концентрирования белковых растворов описаны ниже ( стр. [14]
Проверяют рН белкового раствора и, если нужно, доводят его значение до 7 0 СНзСООН или аммиаком. На водяной бане ( 80 С) нагревают белковый раствор до 60 С, инкубируют 5 мин при постоянном перемешивании. После этого ргствор быстро помещают в лед и охлаждают до 10 С. [15]